📖 实验教程

悬浮培养做CHO、HEK293或者MSC的人，几乎都撞过同一堵墙——摇瓶里飘着一团团白色絮状物，镜下一量直径500 µm往上，中心发暗，活率从95%滑到60%。转速往上加，碎片变多；往下调，团更大。到...

溶氧掉到0，菌体立刻憋死；溶氧飙到100%，代谢又走偏。你调了转速、加大气量，DO还是不动？大概率不是菌的问题，是KLa在骗你。KLa不是仪表上的固定数字，它随装液、黏度、消泡剂、补料、罐压实时变。本...

做重组蛋白纯化的，谁没被标签脱落坑过？跑完SDS-PAGE一看，目标带位置下移，标签没了，纯度直接崩。更气的是，抑制剂明明按说明书加了，降解带还是照出。问题往往不在一个点上。本文按实验流程拆成6步，从...

你花了两个月养细胞、打靶、建库，测完WGS兴冲冲跑完GATK，结果候选脱靶位点列表拉出来三千多个——比sgRNA长度还夸张。这不是CRISPR脱靶率高，大概率是你的检测流程存在系统性假阳性。全基因组测...

做大肠杆菌表达的你，是不是经历过这种崩溃——诱导条件辛辛苦苦摸了两周，菌体一破，目标蛋白全在沉淀里。好不容易把包涵体洗干净、溶了、透析复性，结果复性液一离心，管底又是一层白花花的沉淀，上清里啥也没有。...

做酵母表面展示，最难受的不是没转化，而是流式图上细胞群只比背景高一点。酶活测不到，WB却有带。你以为是蛋白没表达？其实常常卡在锚定。这篇教程按转化、诱导、锚定、检测的流程，拆开讲Aga1/Aga2、G...

做DSF测Tm，曲线像面条？Tm比活性 assay 低10°C？别急着换蛋白。大概率是缓冲液、染料、浓度或升温速率在捣乱。本文从低级错误、样品条件、仪器参数到数据拟合，按实验流程拆开讲。你照着跑一遍，...

做Annexin V/PI，最怕对照组也一片双阳。明明没加药，PI+却飙到20%。你第一反应是药物太毒？先别。假阳性常来自消化、缓冲液、补偿、设门。本文把样本制备、染色孵育、上机采集、数据分析拆开讲，...

切完胶上柱，洗脱下来一测浓度，心里一凉——投了500 ng进去，回来60 ng。回收率12%。你盯着柱子想，是膜失活？离心机的问题？还是这盒试剂盒批次不行？大概率都不是。八成低回收率，问题出在溶解液那...

做无细胞表达（CFPS），最怕看到这一幕：反应结束，离心，上清干净得像没加过模板，目标蛋白全躺在沉淀里。你加尿素去溶，勉强溶开了；一透析，又絮成一团。别急着怀疑体系不行。无细胞体系的沉淀和传统包涵体不...

高密度发酵做到OD600 50以上，本来是拼产量。可乙酸一过2 g/L，菌体立马掉速；葡萄糖一限，OD又不涨。你以为是菌株不行？大概率是补料、供氧和pH没配合好。本文按“低级错误—系统排查—进阶疑难”...

你的CHO表达的重组蛋白，IEF条带一坨，质谱糖肽图峰多得想哭？糖基化不均不是玄学。它可能来自克隆、培养基、补料，甚至你没洗干净的电极。本文按细胞株→种子→培养→补料→纯化→分析全流程，拆开7个常见故...