📖 实验教程

复苏一支细胞，台盼蓝一染，死了一大半。这大概是分子生物学实验室里最让人无语的场景之一。细胞冻存柜里躺得好好的，拿出来一解冻就不行了，很多人第一反应是“冻存管没拧紧”或者“液氮罐漏气了”。真凶往往藏在冻...

熔解曲线跑出双峰，Ct值还挺漂亮——这种“看着能过、其实不能发”的数据最折磨人。多数人第一反应是把退火温度往上抬2℃，抬完发现峰还在，只是Ct晚了。问题不在温度本身，而在你没找对是哪一步出了问题。这篇...

划痕做出来6小时闭合一半，24小时全平，处理组和对照组长得一模一样——这是咨询里最高频的一类。审稿人一句“无法区分增殖与迁移”就能把整段数据否掉。问题大概率不在你的药，而在血清。这篇从培养基配方、细胞...

转染后细胞圆缩、漂浮、贴壁差，很多人第一反应是赶紧换液，结果越换越糟。毒性大不是单一原因，换液时机只是其中一环。这篇按“先排低级错、再按流程拆、收尾看疑难”的顺序，把脂质体/PEI转染后4-6小时换液...

发酵到一半，OD600从8掉到2，溶氧曲线陡然上翘，罐里泡沫翻起来——这画面做过发酵的人都懂。染菌不可怕，怕的是你按常规杂菌的思路去查，查了三天还是复发性污染。噬菌体爆发和普通染菌的处置逻辑完全不同。...

跑完SDS-PAGE，目标带旁边挂着三四个"伴郎"，有的比目标还粗。你第一反应是提高咪唑浓度？先别急着改配方。非特异条带的来源可以从上样前的样品一直追到洗脱收集管，乱改缓冲液只会让下次结果更难复现。这...

做蛋白纯化，尤其是大肠杆菌表达的重组蛋白，最让人头疼的不是收率低——是内毒素死活降不下去。药典要求注射级蛋白内毒素＜5 EU/kg体重，你手头样品测出来动辄几百EU/mL，LAL试剂盒都快用完了。别急...

洗脱峰拖尾最磨人。峰不高，尾巴却长，SDS-PAGE还多出几条杂带。你换柱子、换批次，问题照旧。别急着怀疑填料。pH和缓冲液经常先背锅。这篇把上样、洗脱、收集、检测串起来，给你可直接改的体积、时间、浓...

诱导后OD不涨、甚至往下掉，这是蛋白表达里最常见也最让人难受的场景。你可能刚加了IPTG，第二天一看瓶子还是清的。问题往往不在质粒，而在几个具体动作上：诱导浓度、诱导时机、溶氧、种子液状态。这篇把从接...

包涵体溶解得好好的，一进透析袋就变白。4°C 搅过夜，第二天开盖全是絮状物，上清 A280 掉一半。这大概是蛋白复性里最让人上火的一幕。问题十有八九出在透析缓冲液的组成和换液节奏上。这篇教程按“低级错...

细胞迁移实验里，基质胶稀释比例一错，结果不是全堵就是全穿。你盯着穿膜细胞数发愁，大概率是胶浓度、铺胶体积、凝固温度没对齐。本文按“快速排低级错→分维度查流程→进阶疑难点”走，覆盖浓度换算、冰上操作、铺...

诱导完跑SDS-PAGE，上清一条带都没有，沉淀里全是目标蛋白。你换了宿主、降了温度、把IPTG压到0.1 mM，包涵体还是照旧。别急着从头克隆。可溶性差有一半出在表达条件，另一半得靠分子伴侣系统救。...