📖 实验教程

罐子跑了72 h，OD600到了4.5，丁醇只有3 g/L，pH从6.2掉到4.8又回不到5.5？别先怀疑菌种退化。厌氧丁醇低产，大概率藏在接种、氧化还原、pH窗口和产物抑制里。下面按“先快筛、再流程...

复苏一支冻存了三周的 HeLa，台盼蓝一染，活率 58%。对照管还有 90%。同样一批细胞、同样一盒异丙醇，差距从哪儿来？多数人第一反应是"细胞冻坏了"，其实真正出问题的环节往往在冻存前 30 分钟和...

跑完PCR一看胶，目标带旁边多一条，或者下面拖一片弥散。你第一反应是“退火温度再高点”？别急着改程序。非特异条带可能来自引物、模板、镁离子、污染，也可能就是梯度没排对。本文按“低级错误—流程模块—进阶...

脱靶验证做完，最难受的不是检出脱靶，而是结果不可信：要么全阴，要么一堆假阳性，重做一轮两周起步。带过太多新手卡在这一步，编辑效率明明不错，脱靶测序就是跑不出干净数据。这篇按"样本—扩增—建库—测序—分...

细胞周期同步化最气人的地方：浓度照文献抄，结果不是细胞死一片，就是流式一看没同步。你以为是药不行？大概率是密度、母液、洗涤或时间点先出了问题。下面按“低级错误—流程分维—进阶疑难”拆开讲，覆盖胸苷、H...

做RT反应最烦的不是没条带，是NTC（无模板对照）也起峰。样本Ct 32，NTC Ct 30，qPCR熔解曲线在72°C冒个小尖峰——引物二聚体在作祟。它吃掉逆转录酶、占用dNTP、挤占引物，把真正的...

做原核表达的人都遇到过这种场面：诱导前信心满满，跑完SDS-PAGE一看，上清里干干净净，沉淀里那条目标带又粗又亮。蛋白表达了，只是全成了包涵体。这时候很多人第一反应是换载体、换宿主，折腾两周还是老样...

发酵做到20小时，DO从60%掉到5%，转速拉到800 rpm、通气开到2 vvm还是不回头。这种场面你大概率见过。kLa不够，菌体就先缺氧，产物表达跟着崩，很多人第一反应是“换大罐”或者“再拉转速”...

泡沫顶到排气口、料液从取样口溢出来——这大概是发酵车间最让人心烦的画面之一。消泡剂一加就灵？未必。加少了泡沫照旧顶罐，加多了抑制生长、跟下游纯化打架。这篇把从配方、灭菌、过程参数到设备与消泡剂选型的排...

酵母表面展示做了三周，流式一跑，信号比对照还低。你盯着测序峰图上的那个错义突变，心里犯嘀咕：就一个氨基酸，至于吗？至于。锚定蛋白突变能把展示效率打到背景照度。这篇教程按流程拆解，从低级错误到进阶疑难，...

第5轮了，靶标组的结合率还跟裸珠差不多。Ct值每轮只挪半格。测序回来一堆序列，看不出谁在收敛。这时候最怕的就是硬着头皮继续往下筛——再筛3轮，时间是花了，文库也基本废了。这篇教程按“先排低级错误、再按...

纯化到一半，OD280看着挺漂亮，超滤杯内壁却挂上一层白膜；或者透析袋里飘起絮状物，离心一看目标蛋白全跑沉淀里了。最气人的是跑胶还挺纯，收率却掉了七成。下面按裂解、层析、收集、冻存四个环节，把蛋白聚集...