来源：酵母表面展示效率低锚定（DNA Lab Space 实验教程）| 编译：DNA Lab Space
做酵母表面展示，最难受的不是没转化，而是流式图上细胞群只比背景高一点。酶活测不到，WB却有带。你以为是蛋白没表达？其实常常卡在锚定。这篇教程按转化、诱导、锚定、检测的流程，拆开讲Aga1/Aga2、GPI锚定、培养条件和抗体对照。给你能直接上手的排查动作和参数。别急着换载体，先按下面走一遍。
第一步：快速排查低级错误
- 质粒融合框错了。Aga2下游接你的蛋白，中间不能有提前终止。测序确认读框，尤其连接臂区域。
- 诱导时葡萄糖没换干净。GAL启动子遇葡萄糖就关。用棉子糖培养到OD600 0.5-1，再换半乳糖。
- 转化子丢了或突变。平板抗生素浓度不对，或用SD-Ura/Trp筛选。重新划线单克隆，别用