📖 实验教程

做过外膜蛋白（OMP）的都知道，这活儿和表达普通胞质蛋白完全不是一个难度。诱导后OD600不升反降，菌液发黏，跑胶一看全是包涵体——这样的场景太常见了。OMP要穿过内膜、周质空间、最后插进外膜，中间任...

提质粒，跑胶一看，超螺旋带弱、开环和线性反倒亮——这大概是分子克隆里最让人抓狂的场面之一。转化效率掉一半，转染结果飘，测序也可能出问题。多数人第一反应是试剂盒失效，其实碱裂解那两三分钟才是重灾区。本文...

跑完胶一看，目标带上面下面多出两三条杂带，有的还比主带亮。第一反应是"模板脏了"？先别急着换模板。杂带八成来自引物非特异性结合，而退火温度是控制这事的头号旋钮。杂带多、弥散、拖尾、条带数比理论值多——...

补料发酵最怕什么？DO和pH一起抖，残糖忽高忽低，产物不涨副产物涨。你以为是菌种退化，其实大概率是渗透压震荡把代谢带偏了。本文从低级错误到进阶疑难，按补料液、补料速率、传质、代谢副产物四个维度拆开讲，...

转染48小时，镜下细胞稀稀拉拉，死活染色一片红——这是不是你上周的真实写照？转染试剂毒性大，几乎是每个做原代细胞、干细胞、悬浮细胞的人都会踩的坑。有人怪试剂，有人怪质粒，其实还有第三种可能：你根本没做...

细胞突然皱缩、贴壁变差、生长慢得像蜗牛？你测一下渗透压，大概率超过340 mOsm/kg。别急着换血清。问题多半出在葡萄糖上。高糖DMEM渗透压能到320-340，低糖才270-300。今天这篇，从拿...

脱盐这一步，说穿了就是把咪唑、DTT、盐这些小分子换掉。可你辛辛苦苦纯化出来的蛋白，过完柱子一测浓度掉了70%；再跑个电泳，发现盐峰和目标峰还黏在一块儿。别急着怀疑柱子质量，八成是MWCO选错、转速超...

做PI染色细胞周期，最让人血压升高的不是没染上，而是直方图跑出来G2/M峰高得离谱——明明没加药，G2/M占了40%。别急着怀疑生物学发现，十有八九是粘连体没排干净。两个G1细胞粘一起，DNA含量翻倍...

涂板过夜，第二天一看，密密麻麻全是菌落。挑十个克隆做菌液PCR，九个是空载体。你盯着那板子，心里只剩一句：又自连了。无缝克隆阳性率低，九成问题出在载体线性化不彻底、片段同源臂不够、摩尔比算错这三件事上...

做重组蛋白表达纯化，最崩溃的不是不表达，而是表达了又没了。诱导前有条带，收样后只剩影子。你补了MG132，换了裂解液，条带还是弱。问题大概率不在抗体，而在降解没拦住。这篇教程按实验流程拆开讲：从培养诱...