📖 实验教程

做细菌发酵最怕什么？不是菌不长，是溶氧（DO）反馈自己“抽风”。补料阀一开一关，像得了帕金森，培养基越加越猛，菌体代谢全乱套。你盯着屏幕上的DO曲线，血压跟着一起飙。别急。这篇文章只讲一件事：溶氧反馈...

质粒产量低、酶切没带、PCR阳性但转化死活不长——低拷贝质粒遇上放线菌，新手十有八九栽在破壁这一步。你以为是试剂过期，其实是溶菌酶没吃透细胞壁；你以为是试剂盒问题，其实是裂解时间没校准。这篇教程直接拆...

冻存复苏本该是常规操作，但你遇到的可能是：细胞活率看着还行，一上机测凋亡，早期凋亡和晚期凋亡双高。更气人的是，抗冻蛋白加了，DMSO浓度也调了，结果照样崩给你看。别急着怀疑细胞株娇贵。这篇文章按“低级...

做噬菌体一步生长曲线，裂解高峰比预期晚了半小时，效价还稀稀拉拉。你第一个怀疑是温度设置错，可培养箱显示明明是37°C。别急着调机器。延迟裂解的原因往往是一连串小失误叠出来的，而温度补偿不是简单“升个温...

你昨晚再生的那批内毒素去除膜，今天处理阳性菌蛋白时又超内毒限值了。滤速倒是正常，膜也没堵，可洗脱液跑完ELISA就是压不下去。更气人的是，这已经是这批膜第三次再生了——前两次明明都好的。问题出在哪？别...

你盯着氢气分压曲线，它像心跳图一样上下乱跳。补料泵一开，氢分压就飙；泵一停，产气就掉。培养基耗了一堆，目标产物却没见涨。这个节骨眼上，没人想从头读一遍发酵手册。你只需要知道：哪里坏了、怎么查、怎么修。

做无细胞表达，最怕的不是没蛋白，而是蛋白全在沉淀里。你换了分子拥挤剂，从PEG 3350换到Ficoll 400，甚至加了海藻糖，结果跑SDS-PAGE一看——上清干净得像水，沉淀里什么都有。这活儿不...

双激光多色方案里，你调完补偿，目标荧光信号直接腰斩——这事我见过太多次。有人赶紧加大抗体用量，有人甚至换荧光素，结果问题根本不在那儿。补偿溢出扣多了、单染对照设错了、激光延迟没对齐，任何一个都能让你的...

养细胞最怕什么？不是污染，是pH漂移。明明昨天细胞还圆润透亮，今天一早全飘了；培养基颜色从樱桃红变橙黄甚至紫红，你以为是换液间隔太长，结果换了新鲜培养基，细胞照样不长。问题大概率出在碳酸氢钠缓冲系统上...

做蛋白翻译后修饰（PTM）质谱鉴定，最怕什么？样品跑了，数据处理完，结果一查——关键修饰位点一个都没看到。磷酸化信号弱、泛素化肽段压根没检出、富集完上样量不够……这些坑你大概率都踩过。别急着怪质谱仪，...

你守了一下午Seahorse，探针板水化了、细胞种好了、仪器校准也顺利过了。结果底物一打进去，OCR曲线平得像死海，ECAR像个刚跑完百米的人——飙得离谱。你盯着屏幕，第一反应是细胞死了？机器坏了？还...

做哺乳细胞重组蛋白，转染做了，Western blot 也跑了，结果条带淡得像幻觉。你换了转染试剂、加了DNA量、延长了收样时间，还是老样子。