📖 实验教程

敲除做了三周，PCR一跑全是野生型。你盯着胶图，大概率会怀疑同源臂太短。别急着把500 bp改成2 kb。敲除效率低的原因不止同源臂长度，供体设计、gRNA切割、细胞状态、筛选验证都能把结果拖垮。本文...

酶切跑胶，条带该断的没断、该两条的出现三条——这种时候别急着怀疑酶过期。质粒酶切不完全，十有八九出在缓冲液体系或星号活性上。本文从低级错误到进阶疑难，按实验流程拆成三大步排查：先花5分钟看基础操作，再...

放大到50 L罐，前8小时长得漂亮，OD₆₀₀一到30就趴窝。上清发浑，活菌数往下掉。你怀疑染菌，镜检干干净净。大概率不是杂菌，是搅拌把菌打碎了。这篇教程从转速设定、叶轮几何、溶氧串级、补料节奏一路排...

纯化跑得挺顺，SDS-PAGE单一条带，一进超滤管浓缩就泛白，回收率从90%掉到40%——这大概是蛋白纯化里最让人血压升高的瞬间。别急着怀疑自己手抖，聚集沉淀有明确的物理化学诱因，也能一步步排查出来。...

提基因组DNA，最让人心态崩的不是没提出来，而是提出来了——跑胶一看，全在100 bp到1 kb之间拖成一片弥散。浓度测着还挺高，A260/280也有1.85，可下游做长片段PCR、建库、Southe...

阴性对照亮条带、qPCR起峰，最让人心里一沉。样本还没结果，污染先坐实。别急着换试剂盒。这个问题大概率藏在配液、加样、开盖和检测的某个动作里。下面按从快到慢、从低级到进阶，拆成三步排查：先看水和耗材，...

母离子峰低、响应忽高忽低，标准品进样也不出峰？别急着拆源。LC-MS里前体离子弱，十有八九先看溶剂：进样溶剂、流动相pH、有机相比例、盐和纯度都会压电离。这篇按快速排查、流程分维度、进阶疑难三层走，给...

柱子刚装好那会儿，峰形尖锐、理论塔板数漂亮。用了两周，峰变宽、变拖尾，压力还往上蹿。拆开一看，填料压成了一坨。这不是个别现象——柱效下降和填料压缩几乎每个做蛋白纯化的人都会撞上。本文按“快速排低级错误...

峰拖尾、峰变胖、迁移时间一针比一针早——别急着换柱子。十有八九是样品里的盐在捣鬼。毛细管电泳对离子强度敏感得离谱，样品电导率一旦高过背景缓冲液，堆积效应直接报废。这篇从样品前处理、进样方式、缓冲液体系...

摇瓶里跑了48小时，pH停在5.2不往下掉，总酸只有对照的六成。补了葡萄糖没用，加了碳酸钙也没救回来。这时候你该怀疑氮源了。氮源不足，菌体长不够，产酸自然上不去；氮源过量或形态不对，代谢流又会拐去副产...

跑完PCR、提完质粒，Nanodrop一放上去，读数让你心里一咯噔。A260/280只有1.6，浓度还忽高忽低。是样品真的脏，还是操作哪里出了岔子？别急着重新提取。这篇把紫外吸收定量的常见坑一个个拆开...

冻存管从-80°C拎出来的那一刻，你心里没底。复苏、离心、台盼蓝一染——活率不到一半。明明DMSO加了，培养基也预冷了，细胞还是死给你看。别急着怪血清批次。大概率问题出在降温速率这个隐形环节。这篇从冻...