做微滴PCR最崩溃的瞬间,不是没扩增出来,而是扩增之前液滴就塌了。你辛苦制备的微滴,热循环跑到第20个循环,拿出来一看——油相液面肉眼可见地下降,液滴两两相融,荧光信号一团糟。说实话,这类问题八成不是...
做多肽固相合成最烦的就是偶联率上不去。树脂一测还是浅黄色,缩合试剂换了好几种,收率照样拉胯。你盯了三个小时,最后发现是DIPEA瓶盖没拧紧?别急着怪试剂。这篇文章把偶联率低的原因按排查路径拆开,覆盖投...
做SELEX筛选适配体,最怕什么?富集圈PCR跑出来的条带,跟上一轮不在同一个位置。不是更亮,也不是更暗,是直接漂了。带型从清晰变弥散,大小从80 bp跳到200 bp,或者干脆多出一条非特异条带。你...
悬浮细胞慢病毒转导,效率一直上不去。你试过Polybrene,试过RetroNectin,甚至换过几种电荷助剂,结果还是能用的细胞系还好,换成Jurkat、THP-1、Ramos这类悬浮细胞,阳性率直...
制备好的感受态细胞,一管下去连个单克隆都没有;或者长出来的菌落稀稀拉拉,远低于预期。你检查过质粒浓度,没问题;感受态也是现做现用,不至于全废。那问题出在哪?大概率是热激这一步或者缓冲液体系出了问题。别...
你手里的蛋白,糖基化修饰可能正在毁掉你的晶体筛选、质谱图谱或抗体结合实验。PNGase F 加进去了,37°C 也孵了一整夜,SDS-PAGE 上条带却纹丝不动,或者只挪下来一点点。那种感觉我太懂了—...
跑甲醛变性胶,本指望看到完整漂亮的RNA条带或DNA条带,结果却是弥散一片、条带消失,甚至整孔发亮?这种挫败感太熟悉了。明明核酸提取时浓度和纯度都正常,怎么一跑胶就崩了?
新手看条带,老手看分布。单细胞转录组文库扩增,最怕的不是“没产物”,而是“产物有了,数据全偏”。PCR循环数一多,稀有基因被稀释,高表达基因占据绝对优势——这叫扩增偏倚。你花了大半天分选细胞、建库,最...
你的 Co-IP 结果又花了。目的条带旁边永远黏着几条甩不掉的「影子带」,跑出来丑得不想存图,更别提写论文。你换了抗体、重煮了样本,结果它还在那儿。别急着怪一抗,大概率是封闭和洗涤的细节没卡死。
做蛋白纯化,最烦的不是没挂上柱,而是洗脱峰拖到天荒地老,载量一提就穿透。你加班换了新填料,结果还是老样子,问题可能根本不在填料。这篇文章从低级错误、系统排查到进阶陷阱,帮你把洗脱峰拖尾和载量上不去的根...
发酵罐上的pH电极,最近是不是又让你头疼了?明明上周刚校过,这周灭菌完再测,斜率掉到90%以下,零点的mV值飘得离谱。校准周期从两周缩到一周,再缩到三天,最后还是被迫换电极。别急着下单买新的,问题大概...
做荧光素酶报告基因实验,最怕的就是阴性对照孔亮得像阳性。你调低曝光、缩短积分时间,背景还是压不下去,数据根本不敢用。别急着怪试剂——大概率是你某个操作环节埋了雷。这篇教程带你从最基础的错误开始,一路查...