📖 实验教程

qPCR翻车很常见。标准曲线斜率-4.2，NTC却起峰；样本Ct晚，熔解曲线70°C冒小峰。你以为是模板烂，其实可能是引物二聚体在抢资源。别急着换试剂。这篇把扩增效率低和引物二聚体设计放进同一条排查链...

做无细胞表达，镁离子优化最容易把人磨到怀疑人生。低了，翻译起不来；高了，体系发浑、信号反被压。你铺了0–20 mM的梯度，结果曲线一条平线，或者高点乱跳。别急着换模板。这篇按加样、缓冲、能量、读数全流...

细胞不长、贴壁差、换液就漂，镜下却看不到明显浑浊。一做PCR，支原体阳性。这种隐性感染最磨人：它不把细胞直接杀死，却让实验数据一路飘。别急着扔细胞，也别上来就加药。这篇按“先排低级错、再系统定位、最后...

上周还能载 40 g/L 的柱子，这周同样的上样量，穿透提前了一半。别急着换介质。载量下降九成不是单一原因造成的，多半是清洗不彻底、柱床变形、定量方法偏差三件事叠在一起。这篇教程按“先排除低级错误、再...

纯化跑完，图谱上那个峰又矮又胖，收集了20管，SDS-PAGE一跑全是一个条带——峰却宽得像被拉扯过。或者更糟，峰顶分叉、拖尾到下一个峰里。别急着怀疑柱子报废，也别急着换新填料。八成的峰展宽出在缓冲液...

做qPCR最崩溃的不是没扩增，是目的基因漂亮地扩出来了、内参却忽高忽低。ΔΔCt一算，处理组比对照组"上调3倍"，重复三次三个数。审稿人一句"内参是否稳定"就把你问住了。这篇教程按实验流程从样本到算法...

胶回收做完，Nanodrop一测：浓度18 ng/µL，总量不到500 ng。克隆连不上，测序没信号。你明明按说明书加了洗脱液，也离心了。问题大概率不在“回不回收”，而在洗脱那一步的温度和pH。这篇教...

补料发酵最怕什么？残糖不降，菌体不涨，pH和DO各跑各的。你以为是碳氮比错了，直接加酵母粉，结果泡沫顶罐。碳氮比调控不是算一个数就完事。它跟补料液配制、补料速率、pH控制、取样位置

做qPCR最怕什么？扩增曲线漂亮，一点开熔解曲线——两个峰。你第一反应多半是"引物二聚体"，于是换了新引物，结果还是双峰。或者干脆把模板稀释十倍，峰小了一点，但没消失。问题在于，熔解曲线双峰的成因至少...

离子交换纯化最让人抓狂的场景之一：梯度都跑到40% B了，目标蛋白才慢悠悠出来，比预期晚了整整一管。收峰、跑胶、活性检测，全得返工。绝大多数人第一反应是"柱子脏了"或"梯度设错了"，其实高盐洗脱滞后往...

柱子压力一涨，先别急着拆。很多人看到压力从8 MPa爬到18 MPa，第一反应就是柱头脏了、填料堵了，抄起扳手就要挖填料。结果呢？填料换完压力照旧，甚至更高。问题可能根本不在柱头。这篇教程按"先排低级...