📖 实验教程

诱导条件没调对，包涵体里躺着你苦苦表达的蛋白。别急着换载体或重转菌株，先花半天时间把下面这些坑填平。这篇教程覆盖从诱导剂浓度到降温时机的全流程排查，一步步带你拿到可溶性蛋白。

你花一上午把单细胞分选出来，第二天去看，死了一半，剩下的没贴壁。愁不愁？问题不只在分选机，大概率出在恢复培养基和操作细节上。这篇教程覆盖从分选前细胞准备到恢复期培养的完整路径，按“低级错误→系统排查→...

细胞不编辑，gRNA设计没问题，电转参数也调过三轮了——大概率是核糖核蛋白（RNP）根本没进细胞，或者进了核却没干活。别急着换靶点，先按下面路径排查，从加样到胞内定位，每一步都能定位到具体病因。

菌群实验里，你用CRISPRi把目标菌株的某个基因干扰掉了，预期它的丰度该掉下来，结果Biological replicate三组数据横着飞，要么趋势翻转，要么标准偏差大到连你自己都心虚。这不是CRI...

转染后打开荧光显微镜，对照孔亮得像星星，你的目的基因孔却黑得彻底。换用内参质粒共转染，结果依旧一片死寂。别急着怀疑人生——大概率不是你的实验没做，而是你压根没搞清楚“荧光淬灭”和“转染失败”是两码事。

乳酸飙到2.5 g/L以上，氨浓度超过4 mM，细胞第三天就活不到90%——你盯着生化报告单，第一反应是不是“细胞株退化了”？先别急着复苏新管。乳酸和氨累积是批式培养最经典的代谢危机，但八成因不是细胞...

你肯定遇到过这种场面：亲和层析洗脱峰很漂亮，SDS-PAGE 单一条带，结果内毒素检测直接爆表。更气人的是，换一批料、换一根柱子，结果还是超。别急着甩锅给填料或者缓冲液，内毒素残留大概率是你流程里某个...

做分子克隆最窝火的时刻，不是跑胶没条带，而是酶切过夜后，胶上看到的不是两条干干净净的片段，而是一团模糊的smear——要么切不动，要么切过头。你检查了酶、检查了底物、甚至换了新缓冲液，问题依旧。质粒酶...

你下午刚给细胞换上新鲜培养基，第二天早上过来，镜下看到一片漂浮的碎片，贴壁细胞不到三成。更恼火的是，同样的质粒、同样的脂质体，上个月师姐做就没事。问题出在哪？大概率是你光盯着“转染效率”，把“转染毒性...

你的PCR跑到最后，胶上一堆杂带。目的条带该亮的没亮，不该亮的闪成一片。是不是很烦？

做细菌发酵最怕什么？不是菌不长，是溶氧（DO）反馈自己“抽风”。补料阀一开一关，像得了帕金森，培养基越加越猛，菌体代谢全乱套。你盯着屏幕上的DO曲线，血压跟着一起飙。别急。这篇文章只讲一件事：溶氧反馈...

你提了一管高纯度的DNA，qbit定量也没问题。结果加尾、连接、纯化完，文库浓度低得让人怀疑人生。更气人的是，上机后孔活了半天，就是没reads。这是全实验室最常见的噩梦——问题多半出在DNA加尾和接...