📖 实验教程

做His标签纯化的人，大概率都遇到过这种场面：上样、洗涤、洗脱，SDS-PAGE一跑，目的带旁边糊着一片杂带，分子量还跟目标蛋白挨得很近。你以为是咪唑浓度没配对，加高一点，结果目的蛋白也跟着掉。问题到...

做原核表达最崩溃的时刻，不是蛋白没活性，是SDS-PAGE跑完，诱导泳道和未诱导泳道长得一模一样。你盯着胶看了五分钟，怀疑诱导剂加错了、菌没长起来、还是压根没转进去。别急着把整批样品扔掉。绝大多数"无...

跑完胶一看，条带糊成一团，酶切位点该出的小带没出来，泳道底部还拖着尾巴。酶切失败的原因里，缓冲液与体系配比占了大头，DNA本身和电泳条件也能背锅。下面这份排查清单，从新手最容易踩的低级坑开始，一路查到...

提质粒提出来只有20 ng/μL，跑胶连条带都看不见——这种事谁没经历过？明明过夜菌长得挺浑，试剂盒也没过期，问题多半就藏在碱裂解和中和那5分钟里。碱裂解靠NaOH把细胞撕开、DNA变性，中和靠醋酸钾...

做克隆最崩溃的瞬间，不是PCR没条带，而是连接产物转化后平板上干干净净。你盯着培养箱，怀疑人生：酶是不是失活了？感受态是不是坏了？还是自己手抖？其实转化效率低，90%不是玄学。这篇从感受态制备到热激复...

做Sf9杆状病毒，最崩的是：转染后P1看着还行，P2滴度却只有1×10⁶ IFU/mL，按MOI=5感染，细胞48小时不死，蛋白也不表达。别急着扔病毒。滴度低和MOI算错，往往不是单一问题。本文按转染...

同一管基质胶，昨天铺的孔圆得像弹珠，今天就散成一摊碎渣；同一批诱导，A板满眼CK19阳性囊泡，B板一半是死细胞团。你怀疑细胞代次、怀疑诱导因子，其实大概率是基质胶批次在搞鬼。这篇按「先查低级错误→再分...

补料流加跑了一夜，早上取样一看：OD不涨了，上清乙酸5 g/L，乳酸2 g/L，产物表达掉一半。你调了补料速率，没用。大概率不是单一原因。下面按操作链条拆：从低级错误到进阶疑难，覆盖大肠杆菌、毕赤酵母...

ITC跑到一半，峰平得像停机？别急着怪蛋白不结合。等温滴定量热对缓冲液匹配极敏感，pH差0.1、盐差20 mM、DMSO不一致，都可能把结合热吃掉。本文覆盖从低级错误、缓冲液配方、样品制备到进阶疑难的...

跑了一下午的毛细管电泳，峰形全拖着长尾巴，分离度稀烂。别急着换柱子、也别怀疑样品坏了。峰拖尾十有八九出在缓冲液配方上，尤其是添加剂选错、浓度不对、pH没调准。这篇文章按排查顺序拆成六步，从低级错误到动...

做乳酸菌发酵，最让人抓狂的不是染菌，而是pH一路狂跌到4.0以下，活菌数却停在10⁸ CFU/mL不动了。你补了碱，乳酸产量还是那条水平线；你不补碱，菌直接罢工。这套"产酸抑制"的坑，从摇瓶到50 L...

圆二色谱基线漂移，尤其是低波长区，几乎是每个做蛋白折叠的人都会踩的坑。你刚装好样品，扫描还没跑完，基线就一路向上或向下。别急着怀疑蛋白，大概率是氮气吹扫或光路没伺候好。本文从开机前到数据采集，把氮气吹...