📖 实验教程

抗体纯化做到蛋白A这一步，最让人血压升高的不是收率低，而是SEC-HPLC一跑，单体峰前面冒出个聚集体肩峰。收率掉几个点还能忍，聚集体超标整批就得报废。很多人第一反应是"树脂坏了"或者"抗体本身不稳定...

你筛了几十株信号肽融合体，上清跑SDS-PAGE却一片空白？或者条带比对照弱到看不出？别急着换宿主，八成问题出在信号肽本身或者诱导条件。这篇把信号肽筛选从低级错误到进阶疑难拆成三步，每一步都给判断和验...

你辛辛苦苦表达纯化了一个带His标签的融合蛋白。结果TEV切不动。或者切完目标蛋白没活性。大概率是

做完RNA-seq，跑infer_experiment.py一看，两个方向的reads各占一半，链特异性直接判failed。建库重复一遍、测序重来一轮，钱花了，问题还在。其实链特异性差很少是单一环节崩...

支原体污染最坑人的地方，不是查不出来，而是查了也"没查出来"。培养法便宜、直观，被写进各种SOP，可它的检出下限摆在那儿——10²到10⁴ CFU/mL，低于这个数就是阴性。更麻烦的是，抗生素、血清批...

液滴生成这一步，卡住的人太多了。你配好20 µL反应液、加70 µL油，上机一跑，出来的液滴要么大小不一，要么跑着跑着合成一大片。老板催着要数据，你盯着芯片发呆。这篇教程不讲大道理，按"上机前—油相—...

微载体培养最气人的两件事：消化半小时镜下细胞还死死抱着珠子，好不容易刮下来，换到新载体上过夜一看全飘着。别急着怀疑细胞株有问题，八成是消化条件或者表面涂层没优化到位。这篇按"消化前—消化中—分离—再贴...

补料一加，活率从95%掉到60%，你盯着计数仪屏幕头皮发麻。补料本是提产的常规操作，结果成了翻车现场。别急着扔罐子。本文从补料液配制、补料时机、补料速率到代谢副产物积累，逐层拆解活率骤降的真实原因。每...

做转染的人都懂那种崩溃：昨天GFP还亮成一片，今天同一批细胞、同一管质粒，荧光率掉到10%以下。你换试剂、换血清、重铺细胞，折腾一周还是白搭。问题大概率不在"转染难"，而在脂质体与DNA的配比、复合物...

跑完胶一看，目标带上方或下方多出好几条杂带，甚至拖成一片弥散。这种时候别急着换引物，也别直接重提模板。十有八九是退火这一步没卡住。非特异性条带本质就是引物在错误位置也稳定配上了。本文按“先排低级错、再...

你构建的展示载体，诱导48小时后流式一跑，荧光峰跟阴性对照几乎重叠。抗His抗体染不上，酶活测不出，展示量低到怀疑人生。别急着换载体，也别盲目堆强启动子——问题可能根本不在启动子强度。这篇把启动子筛选...

包涵体溶解了，稀释复性也做了，上清却没多少目标蛋白。你盯着SDS-PAGE，心里只剩一句：又白干了。低尿素稀释速率这个坑很常见：尿素降得太慢，蛋白在2–4 M窗口停太久，疏水面互相贴，聚成沉淀。本文从...