来源：等温滴定量热无信号缓冲液匹配（DNA Lab Space 实验教程）| 编译：DNA Lab Space
ITC跑到一半，峰平得像停机？别急着怪蛋白不结合。等温滴定量热对缓冲液匹配极敏感，pH差0.1、盐差20 mM、DMSO不一致，都可能把结合热吃掉。本文覆盖从低级错误、缓冲液配方、样品制备到进阶疑难的全流程排查。你照着做，能判断是无结合、无热还是假无信号，并拿到可重复的滴定曲线。
第一步：快速排查低级错误
1. 样品池和注射器缓冲液不是同一份透析液？解决：蛋白和配体一起透析到同一烧杯，换液3次，每次至少4 h，4°C，最后一次透析液用来配配体。
2. pH计没校准，两边实际差0.2？解决：两点校准，目标20 mM HEPES pH 7.5，25°C，误差压到±0.05。
3. 注射器有气泡，滴定体积不准？解决：样品10,000×g离心5 min，真空脱气10 min，上样慢推，针尖无气泡。
4. 蛋白池浓度低于5 µM，