📖 实验教程

无缝克隆（Gibson/In-Fusion/同源重组法）做完转化，第二天满怀期待地打开培养箱——结果平板上密密麻麻全是克隆，菌落PCR一验，阳性率却低得让人怀疑人生。更气人的是，挑8个菌落，7个是空载...

文库QC一挂，前面好几个白天黑夜全白干。跑完Agilent 2100/4200看到峰型不对、浓度虚低、接头二聚体“拔地而起”，或者Qubit读数正常但qPCR定量差一个数量级——这绝不是“机器抽风”能...

做酵母双杂交最崩溃的瞬间，不是筛不到阳性克隆，而是筛出一堆假阳性——转进去的空载体和诱饵蛋白也能激活报告基因，换一批酵母还是亮蓝，Western blot 明明没条带但平板照样长菌。假阳性不仅浪费几周...

做无细胞表达最崩溃的瞬间，不是条带没有，而是条带若有若无——目的蛋白产量低到Western blot曝光3分钟才勉强见影，而你连RNase污染还是能量体系崩了都分不清。别慌，这套排查逻辑把“活性低”拆...

做冷冻干燥（冻干）保存菌株，本该是“一劳永逸”的事，结果开安瓿瓶一复苏，平板上一片空白或者只有零星几个菌落，前期菌种制备、冻干保护剂、冻干曲线全白费，实验进度直接卡死。更头疼的是，这种失败往往不是单一...

做灵芝液体发酵，辛辛苦苦摇瓶十几天，最后醇沉一看——沉淀少得可怜，感觉像做了个寂寞。更憋屈的是，菌球长得挺不错，糖产量却迟迟上不去。这种情况在实验室里太常见了，抛开菌株本身产糖能力的问题，操作流程里藏...

做PHA（聚羟基脂肪酸酯）的实验，最怕的就是摇瓶里菌体长得挺好，一测PHA含量却低得可怜。培养基没少配，诱导剂按时加，葡萄糖耗得也不慢，可最终离心收菌那点量，连做提取都不够。更头疼的是，问题往往不是单...

做亲和层析最烦什么？不是没挂上柱，而是洗脱峰拖尾——明明目的蛋白该出来了，峰却像拖着一条“长尾巴”，收峰时要么浓度稀得像水，要么混进杂蛋白，搞得后续浓缩、检测全得返工。你调了缓冲液、改了流速，尾巴还在...

做类胡萝卜素工程菌，最怕的就是菌体长了一大堆，颜色却淡得像“兑了水”的胡萝卜汁。挑转化子的时候看着一片苍白，摇瓶发酵更是让人心凉——工程菌颜色浅，不仅是“不好看”，更直接说明代谢通量没打通、产物产量不...

做慢病毒实验最怕什么？不是转染效率低，不是细胞污染，而是辛辛苦苦包装了72小时，收毒后一测滴度只有10^5 TU/mL，感染目标细胞荧光稀稀拉拉，Western blot条带淡到怀疑人生。滴度低不仅浪...

发酵做了大半年，OD600死活上不去，溶氧（DO）掉到零、pH像过山车——你是不是也怀疑过是自己的菌株有问题？其实大多数时候，不是菌不行，而是你的发酵条件在“暗坑”里没爬出来。这篇教程专治大肠杆菌发酵...

跑胶最怕看到不是一条清晰亮带，而是一片“拖尾弥散”——像墨水滴进水里，目的条带模糊成团，甚至整条泳道都糊成一片。这问题新手遇得多，老手也偶尔翻车。别急着换酶或重提DNA，90%的弥散根源其实就那么几类...