来源：层析柱气泡柱效下降（DNA Lab Space 实验教程）| 编译：DNA Lab Space
跑了一天的凝胶过滤，峰突然变胖、分叉，柱压还一跳一跳？别急着换柱子。十有八九是气泡进了柱床。这篇文章把层析柱气泡和柱效下降的排查拆成三步：先扫低级错误，再按装柱、上样、洗脱分维度查，最后讲几个重装柱的进阶情况。每个原因都给你判断、验证、解决的具体动作。照着做，大概率能救回来。
第一步：快速排查低级错误
别急着拆柱。先看这几个新手最常犯的错。
1. 缓冲液没脱气。现象：柱内出现小气泡，柱效慢慢掉。解决：0.22 μm滤膜过滤后，超声10分钟，或真空抽滤15分钟。在线脱气机开到最大。
2. 样品没离心过滤。现象：上样后柱压升高，峰拖尾。解决：12000×g离心5分钟，取上清过0.22 μm滤膜。别直接上。
3. 柱头接头没拧到位。现象：峰分叉，保留时间不稳。解决：把接头往下拧到刚好接触柱床面，再退半圈。别死拧。
4. 流速一上来就开大。现象：气泡被冲散成小气泡，柱效崩。解决：从0.3 mL/min开始，每5分钟升0.2 mL/min，到1 mL/min封顶。
第二步：分维度系统排查
按实验流程走。从装柱前到洗脱结束，每个环节都可能引入气泡。
1. 装柱前缓冲液和浆液脱气不足。
现象：空柱走缓冲液就能看到气泡，柱效随运行时间下降。原理：溶解气体在压力波动或温度升高时析出，形成气泡。解决：缓冲液和填料浆液都脱气，超声10分钟，真空15分钟，用氦气鼓泡更好。验证：空柱接上柱，走2个柱体积，用手电照柱管，看不到气泡才算过。
2. 装柱时浆液太稀或沉降不均。
现象：柱床有裂纹、分层，峰不对称。原理：浆液浓度低，颗粒按大小沉降，柱床不均匀。解决：浆液浓度调到50%-70%，一次性倒入，用装柱器在0.3-0.5 MPa下压柱，保持压力到柱床稳定。验证：测理论塔板数N和不对称因子As，As在0.8-1.5之间算合格。
3. 装柱后柱头没补满或死体积太大。
现象：上样后峰变宽、分叉，像两个峰叠一起。原理：柱头和填料之间有空隙，样品在里面涡流扩散。解决：打开柱头，用同种填料补满，压到与柱床齐平，装适配接头，排掉死体积。验证：打一针0.5%丙酮，看电导峰或紫外峰是否对称。
4. 上样体积过大或样品太黏。
现象：峰宽，分叉，柱效掉。原理：上样体积超过柱床体积的5%，扩散严重；黏度大还会拖尾。解决：上样体积控制在柱床体积的2%-5%。黏样品先用缓冲液稀释2倍，或换低黏度缓冲液。验证：把上样量减半重跑，峰形明显变尖就是它。
5. 洗脱流速过高或压力波动。
现象：柱压升高，柱效下降，气泡从柱尾出来。原理：高流速加剧涡流扩散，还可能把溶解气体逼出来。解决：按柱子说明书来，一般1 mL/min。接在线过滤器，泵前加脱气。验证：降到0.5 mL/min跑一针，柱效回升说明流速是主因。
6. 柱温波动或缓冲液配错。
现象：保留时间漂移，峰展宽。原理：温度变化改变黏度和气体溶解度。解决：柱温箱25°C恒温，缓冲液现配现用，pH和盐浓度别搞错。验证：走空白梯度，看基线平不平，压力线稳不稳。
第三步：进阶疑难问题
有些情况不是排排气泡就能好的。
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