📖 实验教程

做克隆最崩溃的不是PCR没条带，是连接产物转进去，第二天平板干干净净。你稀释10倍涂板还是长不出东西。感受态效率掉到10⁵ cfu/μg以下，大多数时候问题就藏在CaCl₂这个看起来最简单的试剂里。下...

跑SDS-PAGE，最怕看到条带拖成彗星尾巴。你换抗体、换样品、换操作，结果还是拖。大概率不是蛋白本身有问题，而是胶浓度和电泳条件没匹配好。这篇教程从低级错误到进阶疑难，把胶浓度、样品处理、电压缓冲液...

RNA提取失败，最扎心的不是没产量，是电泳图一坨弥散，qPCR CT值还往后跑。你明明换了新试剂盒，A260/280却只有1.6，28S:18S倒过来。别急着怪柱子。这篇按样品、裂解、相分离、沉淀、洗...

qPCR 跑完，内参 Ct 值比平时晚两三个循环，目标基因干脆没信号。你第一反应是 RNA 提烂了、酶失活了，于是重提 RNA、换新酶，结果还是老样子。停一下。大概率问题出在你根本没在意的引物上。ol...

超声破碎是大肠杆菌裂解最常用的招，也是蛋白降解的头号嫌疑人。你跑完SDS-PAGE，目的条带没了，底下糊成一片。大概率不是没表达，而是超声那几分钟里样品热得能煎蛋。本文沿着冰浴温度这条主线，把低级错误...

同一批细胞，上周分化率还有60%，这周只剩15%。别急着怀疑学生手法。大概率是因子批次换了。本文把从细胞状态到因子复溶、储存、批号、培养基搭配的排查路径拆成三步，给你能直接上手的参数和验证方法。

做大肠杆菌或酵母发酵，最怕什么？罐温曲线像心电图。设定25°C，实际在24.2到26.1之间来回晃。第二天取样一测，乙酸2.8 g/L，乙醇也上来了，目标蛋白表达量掉三成。你怀疑菌株、怀疑质粒、怀疑培...

原代细胞分离出来那一刻，你觉得稳了。铺板、过夜、第二天镜下看——全漂了。换液一吸，细胞跟着走。包被基质做了，浓度也加了，还是不贴。问题往往不在"包被"这两个字本身，而在选型、浓度、操作顺序和细胞状态的...

细胞养着养着状态变差，PCR跑完却什么都看不到；或者明明细胞长得挺好，检测结果却反复阳性。支原体污染检测的PCR不像普通克隆PCR那么“皮实”，菌量低、引物敏感、气溶胶一飘就污染，哪个环节松手都会翻车...

做离子交换，最怕看到两个峰挤在一起。目标蛋白和杂蛋白手拉手下来，收集管一测活性，一半是杂质。你换了梯度、降了流速、换了新柱子，分辨率还是不理想。大概率，问题出在pH上。离子交换的分离基础就是电荷差异，...

DO曲线本来压得稳稳的，突然一根针窜上去，你第一反应是什么？大概率想“缺糖了，补”。可补完DO掉回来，两小时后乙酸飙到3 g/L，OD不涨反降。溶氧反弹到底代表缺碳，还是代表细胞不想呼吸了？这篇把电极...

做大肠杆菌高密度发酵，OD600还没到20，乙酸已经飙到8 g/L，比生长速率μ却掉到0.1 h⁻¹以下。补料一加，乙酸涨得比菌还快。这问题不解决，蛋白表达量直接腰斩。别急着换菌株。本文按流程拆：从低...