📖 实验教程

做酵母转化最打击人的不是没结果，而是重复三次都“清零”，你却不知道问题在哪儿。阳性对照明明昨天还长，今天换了批感受态就全灭；质粒DNA浓度280/260=1.8，测出来干干净净，可当真做起酵母来就是不...

转染做了、抗生素筛了、单克隆也挑了，送去测序却全是野生型——这种“敲了个寂寞”的感觉，做过CRISPR的人应该都懂。敲除效率低的原因很多，但一半以上出在sgRNA设计上。本文按实验流程，从最基础的低级...

做分子克隆最怕的就是这一步：菌液摇得浑浊，试剂盒按步骤加了一遍，最后 Nanodrop 一测，浓度只有 20-50 ng/μL，连酶切都勉强，更别说测序了。你反复看说明书，怀疑是不是试剂盒过期，其实绝...

做分子克隆最怕什么？明明跑胶条带很亮，切下来回收后浓度低到NanoDrop都在报警，连接、转化全等着用，越急越出问题。别慌，胶回收浓度低不是玄学，90%都能找到明确原因。本文从低级错误、系统流程到进阶...

刚做 PCR 那两年，我最怕的就是电泳跑完，紫外灯下一看：主条带失踪在远端微笑，反而是 marker 附近多了一条又亮又糙的“无名氏”——引物二聚体（primer dimer）。跑去问师兄，他扫一眼引...

做细胞培养、微生物发酵或者植物组培，最烦的不是实验本身，而是培养基配好、灭菌一锅出来，pH计一插——好家伙，从7.2直接飙到8.0，或者从6.8掉到5.9。你说补酸补碱吧，调完再灭菌又变回去；你说不调...

做融合基因、定点突变或片段拼接时，重叠延伸PCR（SOE PCR）是性价比最高的方案——两个片段加一段15-20 bp的重叠区，一次PCR就能连起来。但现实是：跑完胶要么只有引物二聚体，要么条带弥散，...

> 辛苦纯化出来的包涵体，复性后蛋白全聚成一团、活性不到10%，或者上清里压根没东西——这是做重组蛋白最崩溃的瞬间。复性效率低，80%不是运气问题，而是流程里某个环节踩了坑。本文按“低级错误→系统排查...

做电转化最让人抓狂的莫过于：质粒没问题、感受态是新买的、电转仪参数按说明书设的，可偏偏转化子就是稀稀拉拉几个，甚至一个不长。你排查了半天电压、时间、质粒纯度，最后才发现罪魁祸首竟然是那点肉眼看不见的盐...

你是不是也遇到过这种情况：目的蛋白纯化后带着His或GST标签，用蛋白酶切了过夜，第二天跑胶一看，条带纹丝不动，跟没加酶一样？或者切出两条带，但大小不对，考染还一片糊。别急着怀疑人生——90%的酶切失...

做转化实验最怕什么？辛辛苦苦提的质粒，涂板过夜后一看，一个单克隆都没有，或者稀稀拉拉长出几个卫星菌落。如果你是新手，第一反应往往是“质粒是不是有问题？”但更多时候，问题恰恰出在感受态制备这一步。CaC...

体外转录（IVT）做mRNA，最怕加帽效率低或完全没有cap-0/cap-1结构。电泳条带忽大忽小、转染后翻译效率暴跌、qPCR检出率异常……问题往往藏在试剂浓度、反应顺序和温育时间这些细节里。本文按...