📖 实验教程

发酵罐上最气人的一幕，莫过于生长曲线漂亮、pH稳得像尺子，唯独DO曲线开始"演戏"：补料一上，OUR不涨反跌；关风测呼吸，斜率软趴趴。你怀疑菌种退化，怀疑补料配方，甚至怀疑自己。先别推翻工艺。十有八九...

超滤浓缩本该是纯化流程里最"无脑"的一步——把样品怼进离心管，转几圈，体积缩下去，蛋白留下来。可现实是：转完一看，管底一层白絮，上清体积是少了，但那是蛋白在跟你告别。损失30%算轻的，有的样品直接干掉...

转染48小时后上显微镜，视野里细胞稀稀拉拉亮着几个，曝光拉到800毫秒还是灰蒙蒙一片。你心里一沉：质粒是不是没提干净？还是转染试剂过期了？别急着重新做，大概率问题出在你能看见的几个环节。这篇教程按“基...

做定点突变，想悄悄去掉一个酶切位点，同时用磷酸化引物做反向PCR自连。结果呢？要么平板上一片空白，要么长出的克隆全是假阳性。别急着扔管子。问题大概率出在引物设计、磷酸化效率、DpnI消化或连接条件上。...

跑完胶一看，条带糊成一片，拖尾、弥散、亮度不均全来了。你怀疑样品降解，怀疑电压不稳，但十有八九问题出在最不起眼的琼脂糖上。这篇文章不扯虚的，从称胶那一刻到拍照记录，把条带模糊的常见和冷门原因一次拆干净...

峰拖尾了。你盯着色谱图骂柱子，其实柱温箱在偷笑。90%的拖尾不是柱子报废。柱温是隐藏变量。低温流动相粘度高，传质慢，峰就拖。本文从低级错误到柱温优化，6步排查。给具体温度、流速和验证方法。照着做，拖尾...

做厌氧发酵，最怕的就是封瓶之后干等一周，产气量还不如空白。pH、温度都查了，底物也换了，还是没动静。问题大概率出在接种量上——加少了菌群起不来，加多了底物不够吃，加错了菌种根本不吃你的料。这篇教程按“...

泡沫顶到罐口，逃液把补料管堵了，取样口一开就喷。你加了消泡剂，泡是破了，可两小时后又起来，菌体还长得慢。问题不一定在消泡剂本身。本文按发酵流程拆开：先查低级错误，再查发酵液、操作、消泡剂、筛选模型，最...

做大肠杆菌表达，好不容易把包涵体洗出来、溶了、透析复性了，结果要么是复性后蛋白全沉淀，要么是透析袋里出来一堆絮状物，要么SDS-PAGE上目标条带直接消失。包涵体复性这本账，坑比表达还多。本文按"低级...

细胞长得慢，上清不浑，PCR却阳性。加抗生素压下去，传两代又回来。这种支原体污染最磨人。本文覆盖：怎么确认污染、怎么选抗生素、怎么设计轮换、处理期间怎么操作、停药后怎么验证。别急着丢细胞，照下面步骤走...

做克隆最崩溃的不是PCR没条带，是连接产物转进去，第二天平板干干净净。你稀释10倍涂板还是长不出东西。感受态效率掉到10⁵ cfu/μg以下，大多数时候问题就藏在CaCl₂这个看起来最简单的试剂里。下...