📖 实验教程

做分子实验最怕“菌不争气”——明明昨天还长得挺好，今天一复苏就长成了“大杂烩”。甘油菌污染是大家心照不宣的痛：菌落形态不对、PCR条带混乱、质粒酶切全切不动……本文直接从实战出发，帮你三步排查甘油菌污...

发酵做了大半年，OD600死活上不去，溶氧（DO）掉到零、pH像过山车——你是不是也怀疑过是自己的菌株有问题？其实大多数时候，不是菌不行，而是你的发酵条件在“暗坑”里没爬出来。这篇教程专治大肠杆菌发酵...

跑胶最怕看到不是一条清晰亮带，而是一片“拖尾弥散”——像墨水滴进水里，目的条带模糊成团，甚至整条泳道都糊成一片。这问题新手遇得多，老手也偶尔翻车。别急着换酶或重提DNA，90%的弥散根源其实就那么几类...

做分子克隆，最怕的就是双酶切验证这一步。胶上要么只有一条带，要么条带位置不对，要么干脆啥都没有，空欢喜一场。你盯着凝胶成像仪里的结果，脑子里反复回放实验步骤，却想不通问题出在哪。别急，这几乎是每个实验...

今天上午有个学生跑来问我："老师，我提的质粒A260/280=1.65，是不是DNA降解了？"我看了眼他的样品，笑了笑——他忘了混匀，吸的是上清。类似这样的"假异常"每天都在实验室上演。但真正麻烦的是...

做克隆三个月，涂板后空无一物、长满卫星菌落、或者只有背景板没有单克隆——别急着怀疑人生。质粒转化失败往往不是「玄学」，而是某个环节的具体参数出了偏差。这篇教程按「先查低级错误 → 系统分模块排查 → ...

做酵母转化最打击人的不是没结果，而是重复三次都“清零”，你却不知道问题在哪儿。阳性对照明明昨天还长，今天换了批感受态就全灭；质粒DNA浓度280/260=1.8，测出来干干净净，可当真做起酵母来就是不...

做Sanger测序最怕的不是无峰，而是峰图里每个主峰后面黏着一个小“尾巴”，或者主峰旁边冒出一个等高的杂峰——套峰。这会让碱基判读直接失败，尤其常见于新手样品。本文不绕弯子，直接从最傻的低级错误到高阶...

做了几十次Gibson Assembly，菌落不是空载就是拼接错误，胶回收条带明明亮的，最后测序却给你一记闷棍。你是不是也遇到过这种“哪里都没错但就是不出结果”的鬼打墙？别急，问题八成出在**同源臂设...

载体线性化这一步，堪称无缝克隆的“鬼门关”——酶切切不动、切完条带消失、跑胶看着挺亮却连不上，甚至空白对照都长满菌落……这些坑我见学员踩过无数次。其实80%的失败原因就藏在几个低级错误里，剩下的20%...

做Gateway克隆，LR反应明明是最后一步“临门一脚”，却经常踢空——平板上寥寥几个克隆，或者全是空载体、假阳性。你反复检查了流程，甚至换了新的酶，可效率就是上不去。别急着怀疑人生，LR反应效率低通...

辛辛苦苦养菌、裂解、上柱，结果目标蛋白洗脱下来一管比一管淡，甚至树脂颜色发灰、挂不上蛋白——这恐怕是镍柱纯化最让人血压飙升的“翻车现场”。更头疼的是，镍柱不便宜，再生几次效果还是回不来。本文按“低级错...