📖 实验教程

你辛辛苦苦提了RNA、建了库，上机测序回来一看比对率——不到50%。数据废了大半，生信同事把锅甩给rRNA去除，但真的是这样吗？大概率是，但不全是。rRNA残留高是常见元凶，可文库浓度、接头二聚体、参...

发酵罐里的OD600停在15不往上走，pH一降就补碱，乙酸浓度飙到3 g/L以上——这套组合拳下来，谁都头疼。高密度发酵养大肠杆菌，乙酸抑制是最常见的“隐形杀手”，而根源大半出在葡萄糖供给策略上。别急...

做Western blot，最崩溃的画面不是条带没有，而是膜上一片棕黑色的“雾”。你的目标蛋白条带被糊在背景里，连marker都看不清。跑胶一个小时，转膜九十分钟，抗体孵育两小时，白干了。

冻存前细胞活得好好的，复苏后一片死相。这种事你遇到几次了？别急着怀疑细胞株有问题，也别急着换培养基。大部分复苏失败，不是细胞脆弱，而是冻存那一步就已经埋了雷。这篇教程不绕弯，直接按“低级错误→系统排查...

提质粒最怕的不是没提出来，而是提出来一堆“废品”——超螺旋比例低，跑胶看到一条模糊拖尾，酶切切不动，测序信号乱，转染效率直接跳水。你守在离心机旁忙了一下午，最后就得到这结果？别急着怀疑人生。这篇文章按...

你盯着扩增曲线，指数期还算正常，可平台期就是趴着上不去，Ct值也忽高忽低。八成是探针浓度出了问题。别急着重做，先花十分钟把下面这几个环节过一遍，多数情况能直接锁定元凶。

你跑了一下午的纯化，最后看色谱图，目标峰和杂蛋白峰糊成一团。盐浓度梯度明明设好了，结果洗脱下来全挤在一起，收率低不说，还要重新调。别急着改程序，大概率问题不在梯度本身。这篇文章从最低级的操作失误，到层...

悬浮培养最烦的就是细胞聚团。一聚团，取样计数乱、转染效率差、蛋白产量掉。很多人上来就调转速，结果越调越糟。本文按“低级错误→系统排查→进阶疑难”三步走，帮你把剪切力参数理顺，搞定聚团。

洗涤包涵体是你纯化路上最磨人的一步。洗不干净，后续电泳全是杂带；去垢剂加猛了，目标蛋白跟着跑光。你试了加Triton X-100、加NP-40、提高浓度，结果泳道里还是一团糟——这并不一定是你操作的问...

做无缝克隆，最怕的不是没克隆，而是菌落长了一大片，挑十个八个拿去测序，全是空载体或错误拼接。你以为是PCR扩增的锅？别急着换酶。我经手过的失败案例里，至少六成以上，翻车源头都指向同一个操作——载体线性...

交联质谱（Crosslinking MS）是你研究蛋白互作和结构的有力武器，但很多时候，你跑完凝胶、切完胶、打完质谱，结果却一片空白——交联位点一个没找到。别急，80%的失败都栽在几个低级错误上，剩下...

做细胞周期实验，卡在G1/S期同步化上，双胸苷阻断法明明是最经典的手段，可结果不是同步效率低，就是细胞大量死亡。别急着换方法，大概率是细节没到位。本文覆盖从试剂配制到释放后取点的全流程排查，帮你一次搞...