📖 实验教程

诱导后OD600从1.8掉到0.6，上清发黏，SDS-PAGE全是宿主杂带——菌体自溶比表达量低更让人崩溃。它多半不是单一原因，而是宿主、质粒、溶氧、温度和下游操作叠在一起的结果。本文按“先排低级错误...

摇瓶过夜，PHA含量只有5%，别人轻松30%。你怀疑菌株，其实大概率是碳氮比、诱导时机、溶氧或提取。本文按“先排低级错→再看流程→再啃进阶坑”走，覆盖菌株、种子、培养基、诱导、发酵、通量、检测全链路。...

收包涵体时，沉淀黄白粘稠，SDS-PAGE 上膜蛋白杂带一堆，目标蛋白却不见纯？大概率是膜碎片没洗掉。别急着上尿素溶解，先看裂解、去垢剂、盐、EDTA、离心条件。本文按实验流程拆成8步，从低级错误到进...

罐子泡沫顶到排气口，补料一开就溢，操作台上全是料液。你加两毫升消泡剂，泡沫压住了，菌也停了。OD不涨、产物掉、镜检全是碎片。别急着猛加消泡剂。泡沫和毒性经常一起出现，单看哪个都误判。这篇按低级错误、系...

支原体污染查了三次都是阴性，结果质粒转染效率断崖式下跌，送检才发现早就中招了。假阴性坑过的人太多了。是取样没取对？PCR体系被抑制了？还是抗生素把支原体压住了？这篇教程按取样时机、样本处理、检测方法、...

做大肠杆菌高密度发酵，最怕什么？不是诱导后没表达，是早上收罐时发现OD600从80掉到20，上清黏得像鼻涕——菌体自溶了，目标蛋白全泡汤。降温早了表达量上不去，降温晚了菌已经烂了。这个时机到底怎么卡？...

跑完亲和层析，一看色谱图就皱眉——主峰后面拖了个长尾巴。收吧，纯度不够；不收吧，收率腰斩。别急。拖尾不是玄学，九成问题出在洗脱前后的操作细节。这篇教程按实验流程拆成三步：先扫低级错误，再分模块系统查，...

你优化了密码子，CAI拉到0.9，结果SDS-PAGE上目标条带还是弱到看不见。别急着怀疑人生，密码子优化只解决翻译效率的一部分问题，剩下的坑可能藏在mRNA二级结构、宿主tRNA库、诱导条件甚至质粒...

做克隆、体外转录、逆转录，质粒线性化是绕不开的第一步。双酶切跑胶，超螺旋带还在，线性带很淡，甚至出现多条杂带。别急着怀疑酶坏了。问题可能藏在缓冲液、甲基化、位点间隔、DNA纯度里。本文按低级错误、体系...

做重组蛋白最怕什么？不是不表达，是表达了但N端一团乱。SDS-PAGE上一条弥散带、两条挨得特别近的带、或者质谱打出来分子量差个17 Da、131 Da。你送去做Edman降解，结果前5个循环出两组峰...

跑完一针，TIC图挤成一坨，峰容量低，鉴定数上不去。你换柱子、洗离子源、调质谱参数，折腾一天还是老样子。问题大概率不在质谱，而在梯度。这篇教程按“低级错误→系统排查→进阶疑难”三层走，每一步都给你判断...

跑完 Western blot，条带没见着，膜上先糊了一片灰。ECL 一压，整张膜像被烟熏过。背景高很少是单一原因，多半是封闭、抗体浓度、洗膜里某一环漏了。这篇按实验流程拆开讲，从样本到显影一步步排查...