来源:高密度发酵噬菌体污染防控(DNA Lab Space 实验教程)| 编译:DNA Lab Space
高密度发酵最怕的不是染菌,是噬菌体。细菌污染能看到浑浊、异味,噬菌体污染常常只给你一个信号:OD600 冲到 20-100 后突然掉,pH 上冲,DO 飙升,泡沫变清。等你发现,整罐已经裂解。本文按“先排低级错→再按流程拆→最后啃硬骨头”的路径,把种子、培养基、灭菌、通气、取样、诱导、清罐全部过一遍。每个原因都给:怎么判断、怎么验证、怎么解决。你直接照着做。
第一步:快速排查低级错误
1. 种子带噬菌体? 扩培早期 OD600 无故下降。解决:取 100 µL 种子做双层平板,37°C 12 h 看噬菌斑;阳性直接丢,换甘油管重新划线。
2. 培养基或补料没灭透? 灭菌后放 37°C 12 h 变清。解决:培养基 121°C 20-30 min,葡萄糖 115°C 15 min,补料罐 121°C 30 min;热敏组分用 0.1 µm 滤膜,别只靠 0.22 µm。
3. 空气滤器或管路漏? 罐体保压掉得快,滤器压差 >0.05 MPa。解决:换 0.22 µm 疏水滤器,管路 121°C 30 min,接头用 1% 次氯酸钠擦 30 min。
4. 取样或加诱导剂带入? 取样口喷溅,第二天就污染。解决:取样前弃前 3 mL,阀口 1% 次氯酸钠消毒;IPTG 现配,0.1 µm 过滤。

第二步:分维度系统排查
1. 种子与菌株维度
现象:扩培正常,转罐后 2-4 h OD600 从 15 掉到 5