来源：感受态转化背景克隆消除（DNA Lab Space 实验教程）| 编译：DNA Lab Space
做了半天转化，平板一过夜就密密麻麻。挑十个克隆，九个是空载体，剩下一个测序还突变。别急着怀疑连接酶。背景克隆有固定来源，从载体线性化到涂板筛选，每一步都能漏。本文按实验流程拆成6个模块，给你判断依据、解决参数和验证方法。照着做，背景能压到个位数。
第一步：快速排查低级错误
- 抗生素加错或失效。氨苄青霉素平板放超过一个月，或者反复冻融，背景直接起飞。解决：现配现用，母液100 mg/mL分装-20°C，工作浓度100 μg/mL。
- 感受态细胞效率虚高。DH5α效率>10^8 cfu/μg，1 ng空载体就能长出几百个菌。解决：做阴性对照，不加DNA转化，应该0个菌落。
- 涂板太晚或复苏太久。氨苄抗性只抑菌不杀菌，复苏超过1.5h，卫星菌落铺满。解决：复苏45-60 min，涂板100 μL，37°C倒置培养14-16h。
- 蓝白斑系统没加对。X-gal和IPTG浓度不够，蓝斑白斑分不清。解决