来源：毛细管电泳拖尾样品盐浓度（DNA Lab Space 实验教程）| 编译：DNA Lab Space
峰拖尾、峰变胖、迁移时间一针比一针早——别急着换柱子。十有八九是样品里的盐在捣鬼。毛细管电泳对离子强度敏感得离谱，样品电导率一旦高过背景缓冲液，堆积效应直接报废。这篇从样品前处理、进样方式、缓冲液体系、毛细管状态四个维度拆开讲，每步都给具体参数和验证动作。照着做，一针就能定位问题。
第一步：快速排查低级错误
1. PCR反应液没纯化就直接上机。 现象是峰宽、拖尾、电流冲高。解决：PCR产物先过柱或乙醇沉淀，再用Hi-Di甲酰胺溶解，别省这步。
2. 纯化后乙醇没除净。 峰矮、分叉、基线飘。解决：70%乙醇洗两次，真空离心干燥5–8分钟，别扔进60°C烘箱过夜。
3. 进样参数照抄隔壁组的。 高盐样品还打10 kV、10秒，峰直接糊成一片。解决：先降到1–3 kV、3–5秒试一针，或改压力进样0.5–1 psi、5秒。
4. BGE反复用了五六次。 迁移时间逐针变短、峰尾拖。解决：1×TBE现配现用，0.22 μm滤膜过滤，4°C最多放一周。
第二步：分维度系统排查
2.1 样品本身——盐到底从哪来
现象：同一批样品稀释5倍后峰明显变尖，原液怎么调进样参数都拖尾。
原理：样品离子强度远高于BGE时，进样端局部电场畸变，样品堆积（field amplification）失效，扩散时间拉长，峰就拖尾。PCR buffer里的50 mM KCl、dNTP、引物、乙醇沉淀残留的NaAc，全是盐。
解决步骤：
① 测电导率：取2 μL样品加98 μL Milli-Q水，电导率控制在BGE的10%以内，Na⁺压到10 mM以下。
② 乙醇沉淀脱盐：加0.1倍体积3 M NaAc（pH 5.2）和2.5倍体积无水乙醇，−20°C放30分钟，14,000 rpm、4°C离心15分钟，70%乙醇洗两次，开盖干燥5分钟，溶于10 μL Hi-Di。
③ 赶时间就超滤：10 kDa MWCO，14,000 g离心10分钟，加200 μL水洗三次。
④ 微量样品用透析：0.025 μm膜浮在Milli-Q水上，20分钟。
验证方法：脱盐前后各测一次电导率，降幅不到一半说明盐没除干净，回头查乙醇沉淀的NaAc有没有加多。
2.2 进样方式选错
现象：电动进样拖尾严重，同一份样品改压力进样峰形明显改善。
原理：电动进样按电荷和迁移率进样，高盐样品会同时带入大量小离子，把堆积区压散；压力进样按体积推，对盐的容忍度高得多。
解决步骤：
① 盐浓度超过20 mM，直接改压力进样，0.5–1 psi、5–10秒。
② 必须电动进样时，电压降到1–2 kV，时间缩到3–5秒。
③ 进样前用BGE预冲毛细管2分钟，别用样品润洗进样端。
验证方法：同一份样品两种进样方式各打一针，比峰宽和理论塔板数。压力进样峰宽收窄30%以上，就锁定是进样方式的问题。
2.3 缓冲液与毛细管状态
现象：换新配的BGE后峰形变好，旧BGE怎么冲柱子都拖尾。
原理：BGE离子强度偏低，和样品电导率差距拉大，堆积更差；pH偏离8.3还会改变样品带电量。毛细管用久了内壁吸附、窗口污染，同样表现为拖尾。
解决步骤：
① BGE用1×TBE：89 mM Tris、89 mM硼酸、2 mM EDTA，pH 8.3；或用供应商配套凝胶，别自己乱兑。
② 毛细管50 μm i.d.、有效长度36–40 cm，柱温30°C，分离电压15 kV，电流稳在10–50 μA。
③ 新柱子用BGE 20 psi冲20分钟再上样；旧柱子每天开机先冲5分钟。
④ 电流突然掉、峰拖尾同时迁移时间整体后移，八成是检测窗口有气泡或盐结晶。停电压，20 psi冲2分钟，不行就拆下窗口用无水乙醇擦。
验证方法：跑一针空白BGE，没杂峰说明柱子干净；连续三针标准