来源：细胞迁移差血清饥饿（DNA Lab Space 实验教程）| 编译：DNA Lab Space
细胞划痕24h还合不拢，Transwell下室没几个细胞，你第一反应是不是血清饥饿没做好？别急着换血清、换细胞。迁移差的原因很多，饥饿只是其中一环。本文按实验流程拆成三步：先查新手低级错误，再分6个维度系统排查，最后处理原代细胞、支原体、自噬这些进阶坑。每个原因都给判断、验证和解决动作，照着做，大概率能定位。
第一步：快速排查低级错误
1. 细胞铺太密。 汇合度>90%时接触抑制，迁移机器先被压住；解决：传代后长到70%-80%就做实验。
2. 血清饥饿太久。 0% FBS过夜到48h，细胞已经凋亡；解决：多数细胞改用0.1%-0.5% FBS，12-24h。
3. 划痕后没洗干净。 碎片和死细胞挡路，边缘看着像没动；解决：PBS洗3次，换0.1% FBS培养基。
4. 上下室都有血清。 趋化梯度直接消失；解决：上室0.1% FBS，下室10% FBS。
第二步：分维度系统排查
1. 细胞状态与汇合度
现象：饥饿后细胞成片脱落，划痕边缘不整齐，Transwell膜上细胞稀。
原理：血清饥饿是同步化，不是饿死。汇合度>90%会接触抑制，传代>10代或支原体污染，迁移能力先天差。
解决：铺板前控汇合度70%-80%。用P