📖 实验教程

同一株DH5α，别人转化pUC19长几百个克隆，你只长几个？CaCl2法看着简单，坑全在细节。菌液OD、离心温度、CaCl2预冷、热激秒表、复苏时间，任何一步跑偏，效率可能从10^8掉到10^5。下面...

拼接PCR又没条带？别急着换酶。大概率是引物重叠区、第一轮产物纯度、第二轮循环条件出了岔子。这篇覆盖从引物设计到模板比例、退火梯度、DMSO添加、多片段拼接的完整排查路径。每个原因给现象、原理、解决、...

你养了200 mL菌，OD一到就加IPTG，离心收菌、超声破菌、跑胶——目标条带全在沉淀里，上清干干净净。这不是你一个人踩过的坑，做过大肠杆菌表达的人几乎都经历过。可溶性表达失败，问题可能藏在诱导条件...

做了一整天的诱导，SDS-PAGE跑完一看——诱导前和诱导后泳道一模一样。没有条带，没有变化，连杂带都没多一条。你会怀疑IPTG配错了，还是菌没长起来？别急着重新做，绝大多数“无表达”不是玄学，是几个...

做电转，一个脉冲下去，时间常数只有3.2 ms。平板过夜，只长三五个菌落。你第一反应是感受态不行，还是质粒不好？别急着扔细胞。八成是盐。电转对离子的容忍度极低，10 μL的盐就能让脉冲能量全变成热。本...

抽质粒浓度只有几十ng/μL？跑胶条带弱到看不见？别急着扔柱子。低浓度往往不是试剂盒的锅，而是某个操作细节翻了车。本文按实验流程拆解6个关键节点，从菌液培养到洗脱保存，给你现象、原理、解决和验证方法。...

菌落PCR挑了几十个克隆，跑胶条带全亮，测序却一半空载？别急着怪感受态。假阳性里，引物特异性问题占大头。这篇从引物设计、菌落模板、PCR体系到电泳判读，把排查路径拆成能直接照做的步骤。覆盖低级错误、系...

冻存菌株复苏是分子生物学实验的第一道关卡。你以为从-80°C拿出来、水浴一化、接进LB就完事？结果第二天摇床里还是清亮亮，或者长出一堆杂菌。别急着怀疑菌种本身，大多数失败都藏在冻存密度、甘油浓度、解冻...

你的厌氧罐是不是几天没气泡了？排液口半天不冒一个泡。别急着倒掉重来。产气不足的原因从漏气到微量元素缺乏都有可能。本文按“低级错误→系统排查→进阶疑难”三步走。覆盖密封、接种、pH、温度、抑制物、气体收...

跑了变性胶，条带又亮又锐，转染进细胞却 IL-6 飙了 30 倍。或者你明明加了 ARCA，质谱一打，加帽率不到 50%。钱花了，时间搭了，结果卡在最后一步。mRNA 体外转录加帽失败，大部分时候不是...

纯化到一半，压力从0.2 MPa飙到0.8 MPa，泵开始报警，峰也歪了。别急着拆柱。离子交换柱压升高，大概率不是单一原因。样品颗粒、缓冲液沉淀、气泡、柱床压缩、滤网堵塞、流速黏度，都会让压力往上走。...

跑完胶，染色时条带还清楚，脱色半小时后只剩Marker？或者背景干净得像没跑过。别急着扔胶，也别怪抗体。脱色过度多半不是单一原因，固定、染色、脱色液、胶厚、上样量、成像都可能坑你。下面按操作流程拆开，...