📖 实验教程
发酵种子活化不足
发酵罐里菌体长得慢、产物合成低，你把目光放到种子液上，发现它本身就是“半死不活”的状态。种子活化不到位，后面补料、控温、调pH全白搭。本文从摇瓶到种子罐，把菌种复苏、培养基、接种量、溶氧、传代等环节拆...
质谱背景高基质效应
做LC-MS/MS，最怕什么？目标峰被背景淹没，基质效应一波动，回收率从80%掉到30%。你明明按文献做了，空白却一直有峰。本文覆盖从试剂耗材、样品前处理、色谱分离到离子源参数、内标校正的完整排查路径...
冻存细胞分布不均
冻存管从液氮里拎出来，融化后一看：底部厚厚一坨，上层几乎没细胞，台盼蓝一染活率只剩40%。这不是细胞系老了，大概率是你冻存那20分钟里出了岔子。下面把细胞状态、冻存液添加、分装混匀、降温速率、复苏解冻...
酶标仪光路偏差
做ELISA，同一板复孔CV从5%跳到20%；做MTT，读数忽高忽低；做BCA，标准曲线R²只有0.95。别急着换抗体、重配试剂。酶标仪光路偏差常是隐形杀手。本文从低级错误到光路校准，覆盖滤光片、光源...
细胞污染快速检测
细胞培养最怕什么？污染。培养基一浑，心就凉了半截。可有时候只是血清沉淀，你却把细胞全扔了。怎么快速判断是真污染还是虚惊一场？支原体这种隐形杀手又怎么揪出来？这篇教程从肉眼观察到PCR检测，手把手带你排...
蛋白定量偏差Bradford
同一管裂解液，昨天测2.1 µg/µL，今天变1.3 µg/µL。标准曲线R²=0.998，样品值却忽高忽低。WB上样量跟着乱，条带越来越不齐。别急着怀疑蛋白降解。Bradford偏差大概率藏在缓冲液...
qPCR孔间差异加样
同一管cDNA、同一对引物、同一块板，复孔Ct差0.8甚至2个循环；溶解曲线一孔单峰一孔双峰；扩增曲线东倒西歪。这活儿干多了你就知道，九成不是"引物不行"，而是加样这步没抠住。下面按排查顺序走：先扫一...
核酸提取降解RNA酶
跑完胶一看，28S/18S糊成一片。NanoDrop 260/280还行，Qubit只剩零头。别急着怪试剂盒。RNA降解九成不是单一原因，而是样品、操作、耗材、环境里某个RNA酶漏点。本文按流程拆：先...
蛋白纯化流穿目标蛋白
跑完Ni柱，SDS-PAGE上一看，洗脱峰空空如也，流穿里那条带倒是浓得刺眼。这种"目标蛋白不结合"的崩溃，实验室里每周都在上演。别急着怀疑人生，九成情况是缓冲液pH、咪唑浓度或者标签出了岔子，剩下的...
摇瓶转速低溶氧不足
摇瓶培养又翻车了？OD600不涨，诱导后蛋白没条带，菌液闻着发酸。你调高转速，还是老样子。大概率不是菌株问题，是溶氧没供上。摇瓶的氧传递效率比发酵罐低一个量级，转速低一点、装液多一口，溶氧就掉到零。本...
细胞培养基沉淀钙镁
培养基刚配好还是清亮的，放两天瓶底就出现一层细白颗粒，显微镜下像碎玻璃碴子乱窜，细胞状态跟着变差。这种钙镁磷酸盐沉淀是细胞房最常见的"玄学事故"之一。有人换水、有人换血清、有人直接把整批培养基扔掉——...
