📖 实验教程

37°C、0.5 mM IPTG 过夜？收菌一跑胶，目标蛋白全在沉淀里。上清干净得像没诱导。别急着换载体，温度、诱导点、裂解方式都可能背锅。本文按“先排低级错→再按流程拆→最后啃疑难”走，覆盖温度、I...

蓝白斑是分子克隆里最省事的筛选手段，也是最容易骗人的。挑了一晚上白斑，酶切一看全是空载体；或者平板上一片蓝，一个白斑都长不出来。问题多半不在连接酶，而在显色系统、载体处理和判读时机。这篇按"快查低级错...

你有没有遇到过这种情况：诱导前取样跑胶，目标条带清清楚楚；不加 IPTG 的对照和加了的一个样。更烦的是，这个本底表达还会拖累可溶性、影响后续纯化。别急着怀疑自己手抖。渗漏这套东西，从宿主菌背景到培养...

你挑的克隆长出来了，菌落PCR也有条带，一测序全是空载体或者乱七八糟的突变。同源重组克隆的假阳性，能把人逼疯。别急着怀疑酶，大概率是载体没切干净、模板没消化、同源臂太短。这篇教程按实验流程拆开，从低级...

做离子交换，最烦的不是不出峰，是出了个拖着长尾巴的峰。收也不是，扔也不是。你盯着那张层析图，心里明白分辨率掉了、纯度也悬。这篇就按"低级错误→分维度系统排查→进阶疑难"三步走，把盐梯度下峰拖尾的常见病...

做克隆最崩溃的瞬间，不是连接失败，是酶切鉴定时看到的不是两条带，而是一片拖尾的弥散。或者更糟——本来该切开的位点纹丝不动，跑胶一看还是原始质粒大小。你换了新酶、重新配了缓冲液、延长了时间，结果依旧。限...

发酵罐OUR突然掉一半，曲线像心电图，你第一反应是不是染菌？别急着倒罐。DO电极才是高频嫌疑人。灭菌后膜破、电解液干、极化不够、电缆干扰，都会让OUR算歪。下面按先快后慢、由外到内的顺序，从低级错误、...

跑WB，目标条带下面拖着一排杂带，或者干脆断成两条。你加了cocktail，换了新批次，问题照旧。别急着怀疑抗体。九成情况是抑制剂体系或者操作链路上有漏洞。这篇按实验流程从头拆一遍：取材、抑制剂配制、...

细胞划痕24h还合不拢，Transwell下室没几个细胞，你第一反应是不是血清饥饿没做好？别急着换血清、换细胞。迁移差的原因很多，饥饿只是其中一环。本文按实验流程拆成三步：先查新手低级错误，再分6个维...

你做完文库，Qubit测出来浓度挺高，qPCR一测却低得可怜？上机后数据量少得可怜，或者PhiX比例失控。别急着怪仪器。接头污染是文库定量里最常见的坑。它会让Qubit虚高，qPCR偏低，两者比值直接...

同一个细胞株，同一批药，换成高血清批次后，Annexin V阳性率从6%冲到38%。你以为是药失效，其实血清批号、浓度、灭活方式都能把凋亡曲线带偏。本文按“低级错误→分流程排查→进阶疑难”走一遍，覆盖...

样品跑着跑着，目标峰往后挪了0.3分钟。你重配流动相，冲洗柱子，进样三次——峰还是飘。别急着换色谱柱。保留时间漂移这事，十次里有四次是柱温在捣鬼，剩下六次是别的地方出了问题但你赖给了柱温。这篇教程按"...