来源：His标签蛋白洗脱峰展宽（DNA Lab Space 实验教程）| 编译：DNA Lab Space
跑Ni柱最崩溃的不是没峰，是峰宽得像土坡。A280一路拖尾，收集管一管接一管，SDS-PAGE却只有一点目标蛋白。目标浓度上不去，还混着杂带。别急着换柱子，也别立刻加咪唑。这篇把His标签蛋白洗脱峰展宽从低级错误、样品、缓冲液、洗脱方法、柱效到检测死体积拆开讲。每条给判断、验证、解决，照着做能定位大多数宽峰。
第一步：快速排查低级错误
1. 收集管太大。用15 mL管接5 mL峰，峰当然被稀释；改成0.5-1 mL/管，按A280逐管收集。
2. 洗脱流速设错。1 mL Ni柱开2 mL/min，传质差、峰拖尾；把洗脱流速降到0.5-1 mL/min。
3. 咪唑母液没调pH。1 M咪唑母液若pH 7.0，洗脱时pH掉，峰宽；用HCl调回7.4，0.22 µm过滤。
4. 柱子没平衡好。上样前至少5 CV平衡，柱头气泡会沟流；排气泡或重装柱。
第二步：分维度系统排查
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