来源:跑胶marker异常条带(DNA Lab Space 实验教程)| 编译:DNA Lab Space
跑胶跑了几百次,marker一歪心就凉。条带拖尾、弯曲、多带、消失,多半不是marker本身坏了,而是胶、缓冲液、电压、上样哪个环节出了岔子。本文按从低级到进阶的顺序,把每类异常对应的现象、原理、动手步骤和验证方法一次列全。你照着做,20分钟内能定位到问题源头,不用再一块胶一块胶地试。
第一步:先花3分钟,排查这4个低级错误
1. 上样量超了。 1.5 mm梳子每孔上5 µL marker足够,上到10 µL条带立刻弥散。解决:按说明书稀释,通常0.5 µg/band就够看。
2. 胶没完全溶解。 琼脂糖里有小白点,条带就扭曲。解决:微波炉中火煮沸,取出摇匀,重复3次,每次30秒,直到液体完全透明。
3. 缓冲液用了太多轮。 TAE用超过3次,pH和离子强度漂移,条带跑得慢还弯。直接换新,500 mL别心疼。
4. 电压飙太高。 10 cm胶给120 V,胶体发热,条带笑弯。按5 V/cm算,10 cm胶给50-60 V,跑40-60分钟。

第二步:分维度系统排查
1. 样品与上样环节
现象:marker整体模糊、拖尾,小片段糊成一片。
原理:上样孔里残留旧样品或盐浓度过高,marker与loading buffer混合不匀,部分分子跑得快、部分被盐拖住。
**解决步骤