来源：重叠延伸PCR拼接失败（DNA Lab Space 实验教程）| 编译：DNA Lab Space
拼接PCR又没条带？别急着换酶。大概率是引物重叠区、第一轮产物纯度、第二轮循环条件出了岔子。这篇覆盖从引物设计到模板比例、退火梯度、DMSO添加、多片段拼接的完整排查路径。每个原因给现象、原理、解决、验证。照着做，少走三天弯路。
第一步：快速排查低级错误
1. 重叠区太短？至少15 bp，最好20-25 bp，Tm 55-65°C。解决：重新设计，用
重叠延伸PCR拼接失败
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