来源:凝胶成像条带饱和曝光时间(DNA Lab Space 实验教程)| 编译:DNA Lab Space
你跑完胶,UV台上一照,条带亮得晃眼。拍照存图一看,中间全是死白,边缘糊成毛边。定量做不了,图也发不出去。这就是条带饱和,十次里有八次怪曝光。这篇把从低级错误到进阶坑全捋一遍,给你一套能照着做的动作链:先查什么、看到什么现象、改哪个参数、怎么验证改对了。
第一步:先查这几个低级错误,别急着换试剂
1. 自动曝光跑满。软件只想找最亮信号,强带直接被推到上限。切手动,起手0.2秒,别用auto。
2. 光圈全开。f/2.8的进光量是f/8的八倍,稍亮的带就顶格。收到f/8再试。
3. 染色泡太久。EtBr染15分钟足够,泡40分钟背景一片亮。你为看清弱带拉长曝光,强带先饱了。
4. 上样量太大。样品孔超过50 ng,条带本身就超量;2 kb ladder每孔5 µL也会白。

第二步:分维度系统排查
**1.