来源：RNA降解严重RNase污染（DNA Lab Space 实验教程）| 编译：DNA Lab Space
跑完胶一看，28S/18S 糊成一片。Nanodrop 浓度低，A260/280 还凑合。你怀疑 RNase 污染，却不知道从哪换枪头。别急。这篇把排查拆成低级错误、流程模块、疑难杂症三层，覆盖样本、耗材、试剂、操作、环境、检测。照着做，大概率能锁定元凶。
第一步：快速排查低级错误
- 普通枪头/离心管直接上：不是 RNase-free 的耗材，管壁可能残留核酸酶。换新开封的无酶吸头，或用 0.1% DEPC 水浸泡 2 h 后 121°C 20 min，烘干再用。
- 手套摸过门把手又摸管子：手套外侧沾 RNase，接触 RNA 就完。每换一个区域换一副手套，碰非洁净面后喷 75% 乙醇，再换。
- 普通水配试剂或溶解 RNA：Milli-Q 水不是无酶水。用 0.1% DEPC 处理水，37°C 过夜，121°C 20 min 灭活，或直接买无核酸酶水。
- 样本反复冻融：组织或细胞裂解后内源 RNase 被激活。新鲜样本液氮速冻，-80°C 只冻融一次；裂解时加 1% β-巯基乙醇或 4 M 异硫氰酸胍。
第二步：分维度系统排查
1. 样本裂解不充分，内源 RNase 没压住
现象：提取液黏，RNA 得率低，28S/18S 弥散。
原理：细胞破裂后内源 RNase 释放，异硫氰酸胍或 β-巯基乙醇不足，没法变性 RNase。
解决：每 50-100 mg 组织加 1 mL TRIzol，组织先液氮研磨成粉，别解冻。每 mL TRIzol 加 10 μL β-巯基乙醇，涡旋 15 s，室温 5 min。细胞用 PBS 洗一次，直接加 1 mL TRIzol 吹打。
验证：裂解液应清亮不粘。取 5 μL 跑琼脂糖，若仍见大分子 DNA 拖尾，延长室温 5 min。
2. 氯仿相分离偷懒
现象：水相取多，A260/230 低，胶图有 DNA 污染，RNA 降解。
原理：中间层 DNA、蛋白和 RNase 混入水相。