来源：An antibody-mediated versatile SERS sandwich biosensor for ultrasensitive detection of functional proteins in cells and tissues（Talanta）| 编译：DNA Lab Space | 原文许可：elsevier-subscription
导读
G蛋白偶联受体、转运体和核受体是三类高价值药物靶点，在复杂生物基质中的快速灵敏检测长期面临挑战。本研究构建了一种基于Fe₃O₄@SiO₂@Ag花状纳米颗粒与Au@Ag核壳纳米颗粒的抗体介导双增强SERS三明治生物传感器，对AT1R、5-HTT和PPARγ三种功能性蛋白的检出限分别达0.26、0.31和0.31 pg/mL，与Western blot结果高度一致。该平台兼具磁分离富集与等离激元耦合双信号增强优势，为低丰度蛋白定量检测提供了通用工具。
研究背景
蛋白质在信号转导、细胞间通讯、离子与分子运输、酶促反应及复杂基因网络调控等生物学过程中执行关键功能。这些功能依赖于动态的蛋白质稳态，任何异常变化都可能引发疾病。G蛋白偶联受体（GPCRs）、转运体和核受体是三类高价值治疗靶点，在细胞或组织中对它们进行快速、灵敏、抗干扰的检测具有重要的科学与临床意义。
传统检测方法中，免疫分析（如Western blot、免疫组化、ELISA）经济实用且可靠，但在亚pM浓度范围内灵敏度不足；荧光分析法灵敏度较高，却受自发荧光和光漂白困扰；质谱法操作复杂。表面增强拉曼光谱（SERS）作为高灵敏通用平台受到广泛关注，其性能取决于分子识别特异性与等离激元热点的增强效率。本研究报道了一种双信号增强的抗体介导三明治免疫SERS生物传感器，以期解决复杂基质中功能性蛋白检测的瓶颈问题。
研究方法
2.1 材料与化学品
正硅酸四乙酯（TEOS）、Fe₃O₄纳米颗粒（NPs，200 nm）、HAuCl₄·3H₂O、甲醛溶液（37%）、聚乙烯吡咯烷酮（PVP，MW = 58,000）和L-抗坏血酸（AA）购自上海麦克林生化科技有限公司。11-巯基十一烷酸（MUA）、N-（3-二甲氨基丙基）-N'-乙基碳二亚胺盐酸盐（EDC）和N-羟基硫代琥珀酰亚胺（NHS）钠盐购自上海皓鸿生物医药科技有限公司。正丁胺由上海源叶生物科技有限公司提供。对氨基苯硫酚（PATP）和4-巯基苯甲酸（4-MBA）购自上海阿拉丁生化科技股份有限公司。硝酸银（>99.8%）、二水合柠檬酸钠（C₆H₅Na₃O₇·2H₂O，99.0%）和氨水（25%）购自天津大茂化学试剂厂。RIPA裂解液和牛血清白蛋白（BSA）购自武汉赛维尔生物科技有限公司。AGTR1兔多克隆抗体（anti AT1R，25343-1-AP）、血清素转运体多克隆抗体（anti 5-HTT，19559-1-AP）和PPARγ多克隆抗体（anti PPARγ，16643-1-AP）购自Proteintech集团（武汉）。HRP标记的山羊抗兔IgG（D110058-0100）来自生工生物工程（上海）股份有限公司。所有实验均使用双蒸水（ddH₂O）。
【数据】Fe₃O₄ NPs粒径：200 nm；PVP分子量：58,000；甲醛浓度：37%；氨水浓度：25%；硝酸银纯度：>99.8%；柠檬酸钠纯度：99.0%；抗体来源：Proteintech；缓冲液：ddH₂O
2.2 仪器设备
采用HITACHI SU8600扫描电子显微镜（SEM）和Thermo Scientific FEI Talos F200X透射电子显微镜（TEM）对NPs进行形貌表征。HITACHI SU8600能量色散X射线光谱（EDS）用于测量NPs的表面元素分布。紫外-可见光谱（UV-Vis）通过Shimadzu UV-1800分光光度计（日本岛津）采集。粒径和Zeta电位通过Malvern Zetasizer Nano ZS纳米粒径分析仪（MAL1241116）测量。Lakeshore 7404振动样品磁强计（VSM）用于测量功能化Fe₃O₄ NPs的磁化曲线。Bruker D8 Advance X射线衍射仪（XRD）用于测定NPs的衍射图谱。拉曼测量在配备532 nm激发激光的Micro-Raman光谱仪（ATR8300BS）上进行。激光功率设为100 mW，采集时间设为100 ms，每个光谱累加5次。每个光谱单次扫描采集，并进行基线校正（基线校正参数为5，平滑参数为5）以扣除背景信号。所有校准曲线均由每个浓度水平的三次独立测量构建（n = 3），误差棒代表标准偏差。
【数据】激发波长：532 nm；激光功率：100 mW；采集时间：100 ms；累加次数：5次；基线校正参数：5；平滑参数：5；重复测量次数：n = 3
2.3 Fe₃O₄@SiO₂@Ag花状NPs的制备
Fe₃O₄@SiO₂@Ag花状NPs通过三个连续步骤合成。
（1）Fe₃O₄@SiO₂ NPs的合成：将Fe₃O₄ NPs（0.1 g）分散于去离子水（10 mL）、氨水（8 mL）和乙醇（180 mL）的混合液中。然后在连续超声（100 Hz）条件下于室温（RT）逐滴加入2 mL TEOS乙醇溶液（50 μL/mL），持续1小时。所得Fe₃O₄@SiO₂ NPs经磁分离，用乙醇洗涤三次，55 °C干燥。
（2）Fe₃O₄@SiO₂@Ag晶种的合成：将Fe₃O₄@SiO₂ NPs（0.1 g）分散于AgNO₃溶液（10 mM，10 mL）中，随后加入50 μL正丁胺（100 mM）。混合物超声1小时，所得Fe₃O₄@SiO₂@Ag晶种经磁分离收集，洗涤三次，重新分散于20 mL乙醇中备用。
（3）Fe₃O₄@SiO₂@Ag花状NPs的合成：取含Fe₃O₄@SiO₂@Ag晶种（0.5 mL）和AgNO₃（0.2 mM，200 mL）的溶液。随后依次加入150 μL甲醛（37%）和300 μL氨水（25%）。超声5分钟后，加入2 mL PVP乙醇溶液（200 mg/mL），继续超声反应10分钟。Fe₃O₄@SiO₂@Ag花状NPs经磁分离分离，用乙醇洗涤三次，储存备用。
【数据】Fe₃O₄用量：0.1 g；去离子水：10 mL；氨水：8 mL；乙醇：180 mL；TEOS乙醇溶液：2 mL（50 μL/mL）；超声频率：100 Hz；超声时间：1 h（室温）；干燥温度：55 °C；AgNO₃溶液：10 mM，10 mL；正丁胺：50 μL（100 mM）；超声时间：1 h；重分散体积：20 mL乙醇；晶种用量：0.5 mL；AgNO₃浓度：0.2 mM，200 mL；甲醛：150 μL（37%）；氨水：300 μL（25%）；首次超声：5 min；PVP乙醇溶液：2 mL（200 mg/mL）；第二次超声：10 min
2.4 Au@Ag核壳NPs的合成
Au@Ag核壳NPs通过柠檬酸钠还原法合成。具体而言，将100 mL含1% HAuCl₄·3H₂O的ddH₂O加入锥形瓶中，加热至沸腾后加入2.4 mL柠檬酸钠（1%）。当溶液变为酒红色时，继续沸腾反应15分钟以形成Au晶种。然后将Au晶种（0.4 mL）加入含1 mL柠檬酸钠（1%）的30 mL ddH₂O中。在持续搅拌下，逐滴加入1.2 mL AgNO₃（10 mM）和0.4 mL AA（100 mM）。混合物在37 °C下温和振荡孵育3小时，获得最终Au@Ag纳米颗粒。
【数据】HAuCl₄·3H₂O：1%，100 mL；柠檬酸钠：2.4 mL（1%）；沸腾反应时间：15 min；Au晶种：0.4 mL；ddH₂O：30 mL；柠檬酸钠：1 mL（1%）；AgNO₃：1.2 mL（10 mM）；AA：0.4 mL（100 mM）；孵育温度：37 °C；孵育时间：3 h
2.5 Fe₃O₄@SiO₂@Ag花状NPs与Au@Ag NPs的抗体功能化
含10 mM MUA的Fe₃O₄@SiO₂@Ag花状NPs在1.0 mL乙醇中超声处理2小时。磁分离后，羧基化NPs重新分散于1.0 mL 10 mM磷酸盐缓冲液（PBS，pH 7.4）中，并与EDC（18.63 mg）和NHS（16.57 mg）超声处理30分钟。所得NPs经洗涤后重新分散于1.0 mL 10 mM PBS（pH 7.4）中，与1.0 μL AT1R/5-HTT/PPARγ抗体在4 °C孵育过夜。为封闭非特异性结合位点，向NPs溶液中加入5%（w/v）牛血清白蛋白（BSA），在37 °C温和振荡30分钟。最终抗体功能化的Fe₃O₄@SiO₂@Ag花状NPs经洗涤后储存于10 mM PBS（pH 7.4）中备用。
Au@Ag NPs加入含5 mM 4-MBA的1.0 mL乙醇中，超声1小时获得Au@Ag@4-MBA NPs。离心后，收集的NPs分散于含EDC（15.56 mg）和NHS（13.81 mg）的1.0 mL 10 mM PBS（pH 7.4）中，超声处理30分钟。活化后的NPs经离心、洗涤，重新分散于1.0 mL 10 mM PBS（pH 7.4）中，并与2.0 μL AT1R/5-HTT/PPARγ抗体在4 °C孵育过夜。采用5%（w/v）BSA在37 °C进行30分钟相同的封闭步骤。所得抗体修饰的Au@Ag@4-MBA NPs经离心收集，储存于PBS（pH 7.4）中备用。
【数据】MUA浓度：10 mM；超声时间：2 h（乙醇中）；PBS缓冲液：10 mM，pH 7.4；EDC用量：18.63 mg（花状NPs）/15.56 mg（Au@Ag NPs）；NHS用量：16.57 mg（花状NPs）/13.81 mg（Au@Ag NPs）；活化超声时间：30 min；抗体体积：1.0 μL（花状NPs）/2.0 μL（Au@Ag NPs）；孵育温度：4 °C；孵育时间：过夜；BSA浓度：5%（w/v）；封闭温度：37 °C；封闭时间：30 min；4-MBA浓度：5 mM；4-MBA超声时间：1 h
2.6 功能性蛋白的三明治免疫分析流程
制备一系列不同浓度的纯化AT1R、5-HTT和PPARγ。人脐静脉内皮细胞（HUVEC）、小鼠海马神经元细胞（HT22）、小鼠胰岛素瘤β细胞（Min 6）的裂解液以及C57小鼠的心脏、海马和脂肪组织按照补充方法1.2中的方案制备。
取等量100 μL抗AT1R免疫Fe₃O₄@SiO₂@Ag花状NPs（0.01 g/mL），与1.0 mL纯化AT1R或HUVEC裂解液或C57小鼠心脏组织裂解液混合。混合物在4 °C孵育过夜，复合物经磁分离收集，用10 mM PBS（pH 7.4）洗涤以去除未结合蛋白。随后，向上达复合物中加入抗AT1R免疫Au@Ag@4-MBA NPs，样品在4 °C孵育过夜。最后，复合物经磁分离，用10 mM PBS（pH 7.4）洗涤，重新悬浮于100 μL 10 mM PBS（pH 7.4）中进行后续SERS检测。分别使用抗5-HTT NPs和抗PPARγ NPs按相同流程检测5-HTT和PPARγ。为验证SERS结果，所有样品同时采用成熟的Western blot分析（WB）进行检测，详细实验方案见补充方法1.3。
【数据】免疫花状NPs用量：100 μL（0.01 g/mL）；样品体积：1.0 mL；第一孵育：4 °C过夜；第二孵育：4 °C过夜；洗涤缓冲液：10 mM PBS（pH 7.4）；最终重悬体积：100 μL；检测靶标：AT1R、5-HTT、PPARγ；验证方法：Western blot
研究结果
3.1 Fe₃O₄@SiO₂@Ag花状NPs的表征
直径为200 ± 10 nm的Fe₃O₄ NPs被用作磁性核心材料（图1a和1i）。经TEOS硅烷化后，直径增至平均值287.53 nm，Zeta电位为-12.07 mV（图1b、1i和1j）。随后，Fe₃O₄@SiO₂ NPs经AgNO₃功能化形成Fe₃O₄@SiO₂@Ag晶种。TEM图像（图1c）显示Fe₃O₄@SiO₂表面锚定了细小银晶种，EDS分析通过检测到明显的Ag元素层进一步证实了这一结果（图S1a–c）。此阶段，Fe₃O₄@SiO₂@Ag晶种的平均直径和Zeta电位分别为549.97 nm和-3.40 mV。尺寸增加归因于银离子在SiO₂表面的静电吸附，而Zeta电位的升高反映了带正电的银离子部分中和了带负电的表面。随后吸附的Ag晶种被还原，形成花状NPs。如图1d所示，出现了花瓣状花状结构的非尖锐分支。EDS图谱和DLS分析显示，Ag含量从0.1%显著增加至22.49%（图1e–g），颗粒尺寸增长至776.57 nm。XRD图谱（图S1d）显示Fe₃O₄@SiO₂@Ag晶种和花状NPs均在38°、44°、64°、77°和82°处出现额外衍射峰，分别归属于立方银的（111）、（200）、（220）、（311）和（222）晶面。花状NPs中这些峰的强度显著强于晶种，证实了完整银壳的成功形成。值得注意的是，Zeta电位降至-7.92 mV，这归因于银还原过程中引入了带负电的表面活性剂PVP。这些数据共同证实了富银花状纳米结构的成功合成。
为考察表面功能化对NPs磁性能的影响，使用VSM表征了其磁响应。如图S1e所示，Fe₃O₄ NPs上的逐步修饰导致饱和磁化强度从77.47逐渐降至19.21 emu·g⁻¹（图S1e）。所有NPs均表现出超顺磁行为，磁化曲线中无磁滞回线（图1h）。这种超顺磁特性防止了无外加磁场时的聚集，并允许通过施加或移除磁场可逆地切换磁性的“开”与“关”。因此，NPs可高效用于复杂样品中的快速简便分离。值得注意的是，所有NPs在相同浓度下均能在30秒内实现完全磁分离，满足后续实验要求。
NPs的光学性质首先通过UV-Vis光谱测试，随后进行拉曼光谱测试。Fe₃O₄ NPs在600 nm附近显示宽等离激元共振，这可归因于其多分散性。相比之下，Fe₃O₄@SiO₂@Ag晶种和花状NPs均在415.0 nm附近显示明显吸收峰，这是银的局域表面等离激元共振（LSPR）特征（图1k）。在拉曼光谱中，花状NPs在848 cm⁻¹处显示强峰，归属于C–H、C–O–C和C–C–C键的面外弯曲振动。该峰强度显著高于其他NPs，归因于Ag花瓣结构产生的高密度电磁“热点”（图1l）。
【数据】Fe₃O₄ NPs直径：200 ± 10 nm；Fe₃O₄@SiO₂ NPs平均直径：287.53 nm；Zeta电位：-12.07 mV；Fe₃O₄@SiO₂@Ag晶种平均直径：549.97 nm；Zeta电位：-3.40 mV；花状NPs粒径：776.57 nm；Ag含量变化：0.1%→22.49%；花状NPs Zeta电位：-7.92 mV；XRD衍射峰：38°、44°、64°、77°、82°；饱和磁化强度：77.47→19.21 emu·g⁻¹；磁分离时间：<30 s；UV-Vis吸收峰：415.0 nm；拉曼峰位：848 cm⁻¹
3.2 Au@Ag核壳NPs的表征
为实现更强的SERS信号，金属纳米材料已从单组分结构向多组分架构演变。其中，Au-Ag双金属纳米颗粒因其优于单金属对应物的稳定性和SERS活性而特别引人注目。本研究采用柠檬酸钠还原法合成了Au@Ag核壳NPs。如SEM图像所示（图2a和2e），Au和Au@Ag NPs均表现出聚集倾向，这可归因于其高表面能和强范德华相互作用。EDS分析证实Au NPs仅含有金（图2b–d）。Au@Ag NPs的元素分布图显示Au（绿色）和Ag（红色）信号重叠分布（图2f–h），表明银壳成功沉积在金核上。定量EDS结果进一步证实了这种核壳结构，Ag含量从Au NPs中的可忽略水平（图2i）急剧增加至Au@Ag NPs中的96.76%（图2j）。水合粒径测量显示Au NPs的平均粒径为25.49 nm，Au@Ag NPs为73.82 nm（图2k），表明Ag壳层厚度约为48.33 nm。Zeta电位分析（图2l）显示表面电荷从Au NPs的-13.53 mV变为Au@Ag NPs的-36.17 mV。这种显著降低可归因于银具有更高的反应活性，在水溶液中比金更容易发生电子流失。此外，UV-Vis光谱显示Au NPs在460.0 nm处有特征峰，Au@Ag NPs在520.5 nm处有特征峰（图S2a–c），进一步证实了Au@Ag核壳纳米结构的成功形成。
【数据】Au NPs Ag含量：可忽略；Au@Ag NPs Ag含量：96.76%；Au NPs水合粒径：25.49 nm；Au@Ag NPs水合粒径：73.82 nm；Ag壳层厚度：~48.33 nm；Au NPs Zeta电位：-13.53 mV；Au@Ag NPs Zeta电位：-36.17 mV；Au NPs UV-Vis峰：460.0 nm；Au@Ag NPs UV-Vis峰：520.5 nm
3.3 双增强花状三明治微结构的表征
为评估合成NPs的拉曼信号增强能力，采用PATP作为探针分子。PATP的巯基（-SH）对金和银表面具有高亲和力，有利于形成稳定的Au-S或Ag-S键。PATP的特征拉曼峰通常出现在1078 cm⁻¹（C-S伸缩）、1182 cm⁻¹（C-H面内弯曲）、1390 cm⁻¹、1490 cm⁻¹和1590 cm⁻¹（苯环C–C伸缩振动）。其中，1078 cm⁻¹处的峰最强且最具代表性，因此被选定量SERS性能。图3a展示了吸附在不同NPs上PATP的SERS光谱，包括Fe₃O₄@SiO₂@Ag花状NPs、Au NPs、Au@Ag NPs以及花状NPs与Au@Ag NPs的混合物。1078 cm⁻¹处的相应信号强度如图3b所示，计算得到的增强因子（EFs）分别为（3.57 ± 0.13）× 10⁴、（7.08 ± 0.27）× 10⁴、（3.88 ± 0.30）× 10⁵和（9.52 ± 0.72）× 10⁵，使用方程EF = I_SERS/c_SERS / (I_Raman/c_Raman)推导得出。
增强因子受入射光与金属纳米结构中自由电子相互作用产生的LSPR强烈影响。它还关键取决于分析物分子与金属表面之间的距离，以及纳米结构的局部曲率——后者决定了电磁“热点”的分布和强度。金属组成、颗粒尺寸和形貌等关键结构参数，特别是尖锐尖端和空腔的存在，直接决定了这些热点的数量和质量。本研究中，由花状NPs与Au@Ag NPs混合组成的杂交基底提供了最高密度的热点，产生了最强的增强因子。因此，该双增强基底被选用于所有后续传感实验。
GPCRs、转运体和核受体代表了三类在药物发现中经常被靶向的功能性蛋白。本研究选择了三个代表性靶标：AT1R、5-HTT和PPARγ，它们分别与高血压和心力衰竭、抑郁症和焦虑症、以及代谢综合征密切相关。为实现对这些蛋白的选择性检测，我们将Fe₃O₄@SiO₂@Ag花状NPs和Au@Ag NPs分别功能化，形成免疫捕获探针和SERS信号探针。SDS-PAGE分析验证了AT1R的表达和纯化（图3d、3e）。
【数据】PATP特征峰：1078、1182、1390、1490、1590 cm⁻¹；EF值（花状NPs）：(3.57 ± 0.13) × 10⁴；EF值（Au NPs）：(7.08 ± 0.27) × 10⁴；EF值（Au@Ag NPs）：(3.88 ± 0.30) × 10⁵；EF值（花状NPs+Au@Ag NPs混合物）：(9.52 ± 0.72) × 10⁵；检测靶标：AT1R、5-HTT、PPARγ
3.4 双增强免疫传感SERS平台的方法验证
图4展示了双增强免疫传感SERS平台的方法验证结果。抗AT1R SERS传感器检测纯化AT1R（图4a–c）和蛋白混合物中AT1R（图4d–f）的拉曼光谱、散点图（1586 cm⁻¹处Δ强度）和线性关系。在纯化AT1R检测中，SERS信号随AT1R浓度增加而增强，在1586 cm⁻¹处显示浓度依赖性响应。校准曲线显示在0.001至100 ng/mL范围内具有良好的线性关系，检出限为0.26 pg/mL。在蛋白混合物中检测AT1R时，传感器同样表现出良好的特异性和抗干扰能力。对5-HTT和PPARγ的检测也获得了类似的良好结果。
【数据】检测峰位：1586 cm⁻¹；AT1R检出限：0.26 pg/mL；5-HTT检出限：0.31 pg/mL；PPARγ检出限：0.31 pg/mL；线性范围：0.001–100 ng/mL
3.5 细胞裂解液和小鼠组织中功能性蛋白的检测
图5展示了所开发的免疫SERS平台在真实生物样品中检测功能性蛋白的应用。该平台成功应用于多种细胞裂解液和小鼠组织样品中功能性蛋白的检测。使用抗AT1R、抗5-HTT和抗PPARγ SERS传感器检测HUVEC细胞裂解液、HT22细胞裂解液、Min 6细胞裂解液以及C57小鼠的心脏、海马和脂肪组织中的目标蛋白。结果显示，SERS传感器能够检测到这些复杂生物基质中的功能性蛋白，且信号与Western blot分析结果高度一致，证实了该平台的可靠性。
【数据】检测样品：HUVEC、HT22、Min 6细胞裂解液及C57小鼠心脏、海马、脂肪组织；验证方法：Western blot；结果一致性：与WB高度一致
3.6 双增强三明治免疫SERS传感器的制备与检测方案
图6展示了双增强三明治免疫SERS传感器的制备和检测方案。图6a展示了双增强免疫SERS底物的合成过程：Fe₃O₄@SiO₂@Ag花状NPs经MUA羧基化后，通过EDC/NHS活化偶联抗体，形成免疫捕获探针；Au@Ag NPs经4-MBA标记后同样偶联抗体，形成SERS信号探针。图6b展示了目标蛋白的SERS检测流程：当目标蛋白存在时，两种探针通过抗体-抗原-抗体相互作用形成三明治免疫复合物，诱导强烈的等离激元耦合，产生浓度依赖的SERS信号放大。
【数据】捕获探针：抗体功能化Fe₃O₄@SiO₂@Ag花状NPs；信号探针：抗体功能化Au@Ag@4-MBA NPs；检测原理：三明治免疫复合物形成→等离激元耦合→SERS信号放大
讨论与解读
本研究开发了一种通用型抗体介导免疫SERS生物传感器平台，用于功能性蛋白的超灵敏检测。该生物传感器将靶标富集域和拉曼报告域整合到三明治型微结构中，实现双信号增强。平台表现出高特异性、低检出限和优异的抗干扰能力，可在细胞裂解液和组织等复杂生物基质中可靠定量目标功能性蛋白。纳米结构的磁性特性有助于净化和分离操作，简化了样品制备流程。当前设计中的捕获机制依赖特异性抗体，但该平台具有内在通用性——原则上，各种高亲和力配体（包括蛋白质、适配体、肽段或小有机分子）均可适配用于靶标识别。同样，具有强且独特拉曼特征信号的不同分子可作为替代报告分子。从三明治生物传感器制备到信号检测的总检测时间约为16-20小时。然而，如果预先制备好抗体功能化SERS底物，样品孵育和检测可在8小时内完成。这种模块化特性表明该平台可适用于生物医学研究、临床诊断和治疗监测等多种应用场景。
编译者解读
该工作巧妙地将磁性富集、花状Ag纳米结构的“热点”效应与Au@Ag核壳的高效SERS活性相结合，通过抗体介导的三明治结构实现了对三类重要功能性蛋白的通用检测。其核心价值在于“模块化”——更换抗体即可适配不同靶标，为低丰度蛋白检测提供了可扩展平台。然而，16-20小时的总检测时间仍偏长，且抗体批次间差异可能影响重现性。未来若能在缩短孵育时间、开发适配体替代抗体方面进一步优化，该平台向POCT方向转化的潜力将更为可观。
参考来源
Ou Y. An antibody-mediated versatile SERS sandwich biosensor for ultrasensitive detection of functional proteins in cells and tissues. Talanta, 2026. DOI: 10.1016/j.talanta.2026.129787
DOI: 10.1016/j.talanta.2026.129787