📖 实验教程

质粒提浓度低，很多人第一反应是试剂盒不行。其实碱裂解时间才是隐藏杀手。时间短了菌没裂开，质粒出不来；时间长了基因组DNA断裂，质粒被切。本文覆盖从低级错误到进阶疑难，帮你把浓度拉回来。

做克隆最崩溃的瞬间，不是PCR没条带，是连接产物转化后平板干干净净，或者只冒出三五个菌落。你怀疑连接失败了，重做一遍，还是老样子。问题大概率出在感受态细胞本身。CaCl₂法做感受态成本低、上手快，但每...

跑胶最怕什么？条带糊成一片。Marker 清楚，样品却拖尾、弥散、微笑，心里直接凉半截。别急着怀疑 DNA 降解。胶浓度选错、缓冲液重复用、电压飙太高，都能让条带糊掉。这篇教程按制胶、跑胶、染色、成像...

跑完胶一看，目的条带上面一条、下面一条，有时候还拖成一整片糊。第一反应是退火温度太低，于是50°C一路拉到60°C，杂带没少，目的带先没了。这事儿几乎每个做PCR的人都踩过。杂带从来不是单一原因，引物...

做了三天，SDS-PAGE上诱导泳道和未诱导泳道长得一模一样。你开始怀疑质粒错了、菌死了、IPTG是水货。先别急着换质粒重做克隆。蛋白表达量低，七成问题出在诱导前那几步——种子液状态、OD600、培养...

发酵到一半，产物越积越多，菌自己先被毒死了。加树脂原位吸附，本意是边产边抓，把游离产物浓度压下去。可实际操作里最常见的结局是：树脂投进去，效价没涨，菌还长得更差。问题到底出在哪？这篇按"低级错误—系统...

做了一下午的逆转录，Qubit测出来800 ng/μL，兴冲冲跑qPCR，Ct值却比上次高了4个循环。你怀疑RNA降解，怀疑引物二聚体，有没有想过——问题可能出在定量那一步？核酸定量不准，十有八九跟染...

做细胞实验，计数是第一道关。可台盼蓝一染，同一管细胞两个人能数出30%的活率差。问题出在哪？是染色时间、取样位置，还是计数板本身？下面按操作流程拆开讲。从新手低级错误，到染色与上板的系统排查，再到凋亡...

跑了六个小时的AKTA，图谱上主峰顶裂成双肩，或者峰又宽又拖尾，拆开柱子一看——柱头上一个明显的坑。这种崩溃感，做蛋白纯化的人都懂。别急着怀疑你的蛋白变成二聚体了，十次里有七八次是柱子或上样环节出的问...

标曲R²=0.998，样本一稀释回算浓度就飘？1:2回收80%，1:10变130%，质控CV从8%飙到35%。这不是酶标仪坏，也不一定是抗体差。ELISA稀释线性差，多半是基质、钩状效应、洗板、拟合模...

过夜摇菌，早上按1:100转接，结果6小时过去，OD600还卡在0.05。隔壁那瓶4小时就浑了。别急着怀疑染菌，大概率是接种龄期出了问题。本文按"基础错误→流程分模块→进阶疑难"三层排查，从种子液OD...