📖 实验教程

纯化柱上挂不住，洗脱峰矮得可怜。别急着换树脂。标签在，蛋白也在，可标签被折叠藏起来了。融合位置选错，N端标签埋进疏水核心，C端标签卡在二聚界面，树脂和抗体都够不着。这篇把亲和标签暴露差、融合位置不对的...

跑胶两小时，结果条带像彗星拖着尾巴，或者浓缩胶半小时了还是液体。这种崩溃你应该不陌生。拖尾和聚合异常很少是单一原因，通常是配胶、样品、电泳几个环节串联出错。本文从最蠢的低级错误讲起，按实验流程覆盖丙烯...

补料泵一转，DO上冲、碱耗变慢、OD600斜率变小。你以为菌老了？先别急着加IPTG。补料不足会让比生长速率μ掉，但μ掉不一定只是补料不足。溶氧、乙酸、pH、诱导强度、泵管老化都会伪装成同一张脸。本文...

做大肠杆菌表达、跑完诱导的菌，下一秒就卡在超声破碎上——上清里没蛋白，SDS-PAGE一跑全在沉淀里；样品摸着温乎，泡沫堆成小山；探头嗡嗡响半天，菌液还是浑的。大概率不是你的质粒有问题，是热量没控住。...

qPCR跑完，扩增曲线要么翘尾、要么压成直线、要么Ct值飘得离谱——大概率不是试剂坏了，而是基线（baseline）没设对。基线是荧光信号扣除背景的那段"地基"，设歪了，整条曲线都跟着变形。本文按"低...

转染效率低，荧光稀稀拉拉，细胞死一片。你换试剂、调密度，还是老样子？大概率是DNA纯度拖后腿。别急着换试剂。本文按流程拆解：质粒提取、内毒素、盐残留、细胞状态、转染操作、检测时间，再给进阶疑难和避坑清...

提RNA最让人抓狂的不是提不出来，而是提出来了、浓度也测得到，一跑胶全是弥散拖尾，28S/18S塌成一团。你换了新试剂盒，还是烂。别急着把锅甩给试剂盒——九成问题出在环境、耗材和你的手。这篇教程按"先...

你跑完SDS-PAGE，发现镍柱洗脱液里目标带旁边全是杂带。把咪唑从250 mM升到500 mM，杂带还在，目标蛋白却开始掉。别急着怀疑标签没连上。杂带多、咪唑洗不干净，通常不是单一原因，而是裂解、结...

转化效率上不去，平板上一片空白，或者只冒出三五个星点——这种时候别急着换试剂盒。问题大概率出在你自己的操作里。这篇教程按“先查低级错误、再按流程拆模块、最后啃疑难”的顺序走，覆盖感受态制备、热激、复苏...

昨天刚换的液，今天酚红就发黄了。细胞圆缩、贴壁变差、飘起来，你一测pH只有6.8。大概率不是细胞的问题，是缓冲体系塌了。碳酸氢钠这套CO₂/HCO₃⁻缓冲对，靠的是培养箱5% CO₂和培养基里1.5–...

两个蛋白只差一点点电荷，峰却死活分不开。收峰时你盯着那个"胖馒头"，收前边沾后边，收后边带前边。别急着怀疑柱子坏了，八成是梯度斜率、pH或者上样量在捣鬼。这篇教程从新手最爱犯的低级错误讲起，一路拆到缓...