📖 实验教程

做抗体纯化最怕什么？不是柱子堵了，不是紫外灯飘了，而是洗脱峰看着挺漂亮，一收样却发现：要么目标蛋白聚成一团白浊，要么洗脱峰拖尾到天荒地老，要么收率低到怀疑人生。蛋白A亲和层析的洗脱pH，就是那个“牵一...

细胞在微载体上长得正欢，第二天一早发现培养瓶里飘满载体、细胞所剩无几——这种“一夜回到解放前”的崩溃场景，几乎所有做微载体培养的人都经历过。细胞脱落≠搅拌调小这么简单，它可能藏在转速、换液、贴壁期、载...

细胞冻存复苏，听着简单，做起来却像开盲盒——有时候质地清爽吹弹可破，有时候一片死气沉沉，细胞要么飘着不贴壁，要么贴壁了却不增殖。你查了protocol，换了培养基，甚至把血清也换了，还是活率低，问题到...

做重组蛋白表达，遇到包涵体几乎是家常便饭。更让人抓狂的是，好不容易把包涵体溶解了，复性时却一团浑浊、沉淀、甚至“假溶清”——透析袋里清了，活性却为零。你调整了十几个条件还是没起色？别急着换载体，问题很...

做转染实验，质粒提得好好的，转染试剂也是新开的，Lipo、PEG、电转参数都跟师兄师姐的Protocol一模一样，结果荧光图一片黯淡，mRNA水平几乎没变化。你开始怀疑试剂、怀疑操作、怀疑人生——但很...

做分子克隆最怕什么？不是连接失败，不是转化空白，而是酶切鉴定时胶图上出现一条“不该出现”的条带——比预期大、比预期小、或者多出一条。你反复核对NEB或Thermo的说明书，内切酶没错、Buffer没错...

克隆PCR又双叒叕空跑胶了？阳性率低到怀疑人生，模板、酶、引物挨个背锅，最后发现是引物设计埋了雷。别急着重新设计20对引物，也别把宝贵质粒全搭进去。这篇教程聚焦「克隆PCR引物设计导致的阳性率低」，带...

做蛋白纯化最怕什么？不是目标蛋白没挂上，而是明明上次还能上样50 mg/mL介质，这次只挂上去20 mg就穿透了。你第一反应是“介质不行了”，但直接报废换新？一升介质好几千块，老板的脸比你的紫外吸收峰...

做转染实验最崩溃的瞬间是什么？明明质粒没问题、细胞也养得挺好，但荧光显微镜下一看，稀稀拉拉几个亮点，转染效率不到20%。更折磨人的是，你查了无数篇文献，试了好几种脂质体，结果还是“薛定谔的效率”。别急...

做蛋白纯化的人，谁没在透析这一步崩溃过？辛辛苦苦表达、裂解、纯化，最后把样品装进透析袋，第二天回来一看——管里清汤寡水，膜上挂满白渣，或者沉淀多到像豆腐花。更要命的是，你换了pH、降了浓度、加了甘油，...

摇菌提质粒本来一上午就能搞定，可跑胶一看：条带模糊、拖尾、弥散，或者质粒条带变得七零八落像被“啃”过一样。更气人的是浓度测出来值还挺高，但酶切死活切不动，转染效率也拉胯。这一般就是质粒DNA发生降解或...

做单细胞测序，最怕的不是细胞数少，而是好不容易建好的文库，一看数据——扩增偏好（amplification bias）严重，基因覆盖度稀碎，UMI重复率反常，或者干脆某些高表达基因占比爆炸。你可能会怀...