📖 实验教程
质粒酶切图谱异常星活性
跑完胶一看，泳道里除了预期条带，还多出几条淡淡的杂带。重抽质粒、换管酶，还是老样子。十有八九不是质粒错了，是限制酶开了星号活性——它在非最适条件下放松了对识别序列的挑剔，开始在相似位点上乱切。这篇教程...
发酵接种密度低迟滞期
接种后24小时还不浑浊，pH不动，DO不降。你大概率会怀疑培养基、菌株，甚至想倒罐重来。别急。低接种密度把迟滞期拉长，往往不是单一原因。本文按操作链拆开讲：从种子液活力、接种量换算、培养基适配，到溶氧...
蛋白复性聚集添加剂筛选
做包涵体复性的人都有这个体验：变性蛋白澄清透明，一稀释复性立刻乳白浑浊，离心收沉淀，上清还没活性。你开始怀疑变性剂、怀疑pH、怀疑标签，其实七八成问题出在复性操作和添加剂本身。这篇按「低级错误→流程分...
蛋白电泳迁移异常还原剂
做SDS-PAGE或Western blot，最怕条带位置不对。明明加了DTT，还是出现二聚体、多聚体、拖尾或弥散。别急着换抗体或重跑。大概率是还原剂环节出了问题。本文从低级错误到进阶疑难，覆盖还原剂...
质谱鉴定得分低肽段提取
跑完胶内酶切，上机等了两个小时，结果Mascot score只有20出头，只鉴定到一两个肽段，覆盖率个位数。你盯着报告发呆，第一反应是质谱仪坏了。先别急着报修。九成情况问题出在肽段提取和上样环节。下面...
发酵尾气CO2高碳源过量
罐子刚跑起来，尾气CO₂从3%冲到12%，补料罐液位肉眼可见往下掉。你第一反应是减补料？别急。CO₂高不等于碳源过量，也可能是通气、搅拌、pH，甚至是探头本身在骗你。下面把从管路到代谢的排查点按顺序拆...
细胞冻存复苏活率低降温
复苏后活率不到50%，细胞碎片满视野，一个月白忙。别急着怀疑血清批次。90%的活率暴跌都出在降温环节。本文从冻存前状态、降温速率、-80°C转移节点到复苏操作，逐项拆解降温相关的活率杀手。每一步给具体...
发酵溶氧骤降转速关联
下午三点，DO从65%掉到8%，只用了四分钟。转速设定800 rpm，读数却在650上下晃。菌不等人，产物的窗口期就那么几个小时。溶氧骤降还跟转速扯上关系，八成不是单一原因——供气、搅拌、泡沫、菌体代...
微量核酸定量偏差荧光染料
做微量样本的人都有过这种经历：同一管 RNA，NanoDrop 读出来 80 ng/µL，Qubit 却只给 25 ng/µL；或者前一天 R² = 0.999，今天标准曲线直接掉到 0.97。样本就...
T4连接酶效率低摩尔比
连接做了一整天，转化板上一片白。心里凉半截。别急着换酶，大概率是摩尔比和体系细节出了问题。T4连接酶效率低，不是玄学。载体多少ng，插入片段多少ng，比例怎么算，buffer冻融几次，PEG加没加，温...
基因合成错误多序列验证
你花几千块合成基因，拿到克隆送测序，结果一条序列三四个点突变，换个克隆又是另一种错。心态崩了？别急着骂供应商。合成、组装、克隆、测序每个环节都可能引入错误。这篇教程按实验流程拆成5步排查，从低级错误到...
质谱肽段覆盖低酶切时间
做质谱最怕什么？样本跑完，搜库只鉴定到十几个肽段，覆盖不到20%。老师第一句就是“酶切时间够吗”。你过夜了，还是低。别急着怪仪器。覆盖低往往不是单一原因，样本裂解、还原烷基化、胰酶活性、脱盐、LC-M...