📖 实验教程

细胞养得好好的，一支PCR下去，阴性对照也亮条带——这时候你心里大概已经凉了半截。支原体检测的假阳性最磨人：它不像污染那么直观，条带出来了你却不敢信，杀一轮、传几代、再测，还是模棱两可。这篇把常见原因...

细胞培养基刚配好就浑浊，过滤时注射器推不动，滤完放两天又出现沉淀。这些问题不解决，细胞状态直接崩。本文按配制、pH、过滤、储存四条线，给你可落地的排查动作，附具体参数和验证方法。别急着扔培养基，先按下...

挑克隆挑到手酸，摇菌摇了一整天，测序结果一出来——空载体、反向插入、模板残留，一个对的都没有。这种崩溃感，做无缝克隆的人都懂。假阳性不是玄学，它几乎总能追溯到某一步的具体操作。这篇教程按「低级错误 →...

提完核酸，Nanodrop一测，浓度200 ng/µL，A260/A280 1.85，看着挺美。可下游PCR就是不出条带，qPCR曲线压得极低。别急着怪引物，大概率是抑制物残留。乙醇、盐、胍盐、多糖、...

qPCR跑完，目的基因趋势漂亮，内参却忽高忽低？或者审稿人问“你凭什么用GAPDH”时答不上来。内参不稳，整组定量都可能翻车。本文只盯一件事：内参基因稳定性验证。从低级操作、RNA/cDNA、引物效率...

TA克隆方向反了，实验进度直接卡住。你测序回来一看，插入片段跟参考序列反向互补；酶切条带也对不上，菌落PCR还时有时无。别急着换试剂。TA克隆载体两端都是T，PCR产物两端都是A，正反插入概率接近1:...

平末端连接做过的都懂：转化板上一片白，阳性克隆个位数。粘末端连接半小时能拿几百个克隆，平末端过夜还常常只有十几个。问题不在你手笨，多半是体系里某个环节被忽略了。这篇教程从低级错误到进阶疑难，把平末端连...

发酵罐上pH一掉，补料泵猛加碱，pH冲过头又猛加酸，来回振荡两小时，菌体不长了。这种场景你肯定见过。pH反馈补料本来是让菌体稳在设定值附近，结果成了振荡器。问题可能出在电极、PID参数、补料泵、甚至代...

细胞养着养着，突然变圆、皱缩、贴壁松、传代后贴不上，或者长到第3天就集体凋亡——你换过血清、换过批号、怀疑过支原体，最后发现渗透压计一插，340 mOsm/kg。培养基渗透压这事，平时没人盯，一出问题...

做了三批纳米抗体，上清里一条带都看不见，全糊在沉淀里——这事我见得太多了。VHH只有15 kDa，分子小、折叠依赖二硫键，在大肠杆菌里比普通蛋白更容易掉进包涵体。很多人第一反应是换载体，其实大概率是标...

同一个6孔板，左边划痕6 h快闭合了，右边还宽得像刚划的。明天要交数据，重复三次还是不均。别急着怪细胞。问题大概率出在铺板密度、划痕手法、血清批次，甚至边缘蒸发。这篇教程按准备、划痕、培养、统计全流程...

做大肠杆菌表达的重组蛋白，纯度都95%了，内毒素却卡在100 EU/mg下不来。别急着换纯化方案。80%的内毒素残留，问题出在样品前处理、缓冲液和器皿上。本文按“从粗到细”的路径，拆解蛋白纯化内毒素去...