📖 实验教程

跑完SDS-PAGE，目标带下面多出一条"鬼带"；抗His一杂交，标签信号全在小带里——做重组蛋白的人基本都撞过这堵墙。融合标签被宿主菌蛋白酶降解，不是运气问题，是条件问题。下面从低级错误到进阶疑难，...

发酵罐跑了一夜，第二天取样一测OD600才0.3，隔壁同样条件的罐子已经飙到6.8。问了一圈，操作记录上写着"接种量1%"，看着没毛病。问题往往藏在你没注意的细节里。接种量低本身就会拉长延滞期，但到底...

酶切跑胶最怕什么？母带还在，下面一片拖尾；想做时间梯度，0 min和120 min看起来差不多。你以为是酶不行，其实大概率是DNA、buffer、甘油或终止步骤在捣乱。本文按“先查低级错，再按流程拆，...

你的蛋白37°C放两小时就浑浊，DSF曲线像过山车，甘油、精氨酸、海藻糖加了个遍，Tm只挪了0.8°C。别急着给蛋白判死刑。大概率不是添加剂不够神，而是样品状态、缓冲液底子或者检测方法先把结果带偏了。...

做CRISPR的你大概率遇到过这种场面：gRNA用在线工具打分0.9，脱靶预测也干净，转染48小时后T7E1酶切——条带纹丝不动，敲除效率连5%都不到。问题出在哪？不是所有低效率都怪gRNA序列。本文...

划痕实验看着简单，做起来头疼。边缘像狗啃，宽度忽大忽小，0h照片没法看。别急着扔板子。今天从划痕器本身到细胞状态，再到培养基和操作手法，6步排查一次说清。你照着做，大概率能救回下一批。

你跑完qPCR，阴性对照起跳了。反转录没加酶，Ct值跟样品差不多。别急着怀疑引物二聚体，大概率是RNA里的基因组DNA没除干净。这玩意儿轻则让表达量虚高，重则让敲低实验白做。本文从样本处理到DNase...

做过Gateway的人大概都遇到这种场面：BP反应顺顺利利，Entry clone测序全对，结果LR反应做完转化，平板上就长三五个克隆，还不一定是你要的。挑出来摇菌提完质粒一跑胶，发现是空载或者大小不...

包涵体复性最气人的不是没活性，是刚透析完就白浊，离心后目标蛋白全在沉淀里。你以为是蛋白没救，其实大概率是浓度、pH、加料速度或氧化还原对没控住。本文按流程拆开：先抓新手低级错误，再分模块查洗涤、溶解、...

转染荧光很亮，收毒一测只有10^5 TU/mL？别急着换试剂盒。滴度低通常是细胞状态、质粒比例、收毒窗口和检测方法一起拖后腿。本文按实验流程拆开排查：先查低级错误，再分模块看细胞、转染、质粒、浓缩和滴...

细胞培养最怕什么？不是污染，是你早上打开培养箱，发现培养基从樱红变成了葡萄紫，或者黄得像橙汁。pH一漂，细胞状态就崩，贴壁的飘了，悬浮的抱团了，做实验的数据全废。很多新手第一反应是"二氧化碳浓度不对"...

做克隆的人都有过这种时刻：电泳条带明明亮得刺眼，回收完一测，浓度只有8 ng/μL。PCR、酶切、连接全卡在这一步。别急着怀疑试剂盒过期。胶回收低效，九成问题出在凝胶浓度、溶胶条件、洗脱参数这三件事上...