📖 实验教程

收管收到第12管，UV280还是没回到基线，SDS-PAGE一跑，目标带前面还挂着两条杂带。收，纯度不够；扔，产量掉一半。这个场景几乎每个做His标签纯化的人都遇过。峰宽不是单一原因造成的——上样超载...

跑SDS-PAGE最怕什么？Marker漂亮，你的条带却像波浪、笑脸、拖尾，电压表还一跳一跳。别急着换胶。条带扭曲和电压不稳常常是一根线：缓冲液、散热、电源、上样量互相牵连。下面按从快到慢的路径走，先...

配好的DMEM放4°C过夜，瓶底一层白雾；F12刚解冻就发浑；加完血清半小时浮起絮状物。多数人第一反应是"染菌了"，整瓶倒掉。可惜，一大半只是钙镁磷酸盐析出，还有救。这篇按实战路径走：先花三分钟排低级...

溶氧掉到5%以下，转速一调上去泡沫乱飞，菌体还长不好。这类问题十有八九不是罐子坏了，是搅拌和供氧这对搭档没谈拢。有人的罐P/V加到3 kW/m³还是救不回来，有人的罐转速只有200 rpm，溶氧稳稳6...

做数字PCR最怕什么？微滴生成油一加，显微镜下全是模糊一片，液滴大小不一，有的干脆连成一片。你以为是PCR mix的问题，其实八成出在油相和流路。这篇教程把油相配方、流速比、芯片润湿、扩增后稳定性全拆...

你提完质粒，跑胶一看浓度不错，260/280也漂亮，结果酶切一晚上，电泳图上要么是原质粒一条带纹丝不动，要么是弥散成一片拖尾。这种“看着挺好、一切就废”的情况，八成就栽在甲基化上。质粒提取酶切位点被甲...

跑完胶一看，酶切图谱跟预测对不上。该出现的带没出现，不该有的小带倒挺清楚。别急着怪酶或质粒。质粒酶切异常片段通常来自酶切不完全、位点甲基化、质粒突变或重组、缓冲液不兼容、电泳判读偏差。下面按快速排查、...

做定点突变，PCR跑完，DpnI消化，转化，第二天板子上长了几十个克隆。你满心欢喜挑几个测序，结果全是野生型模板。气不气？DpnI消化不彻底是头号嫌疑。但别急着怪DpnI，模板量、引物设计、感受态状态...

高密度发酵做重组蛋白，最让人头大的不是转化，是补料。甘油给快了，乙酸飙到 6 g/L，菌体直接罢工；给慢了，OD 卡在 30 不动，表达量惨不忍睹。明明按文献算的指数补料，跑出来就是不对劲。这篇把补料...

抽完质粒，上样2 μL跑个1%胶，结果泳道里一片模糊，超螺旋带没了，拖尾从孔一直拉到最下面。做转化、酶切、测序全都卡在这一步。这种"DNA降解/片段化"的坑，十有八九不是试剂盒烂，而是裂解、中和、保存...

你诱导完跑SDS-PAGE，泳道里干干净净；或者那条目标带比头发丝还细。换过宿主、降过温度、加过IPTG，分泌蛋白就是不进培养基，周质也捞不到多少。问题大概率出在信号肽上——它不是一段随手拼的"运货标...

发酵罐里 OD600 从 80 掉到 40，上清 DNA 飙到 500 ng/µL，镜检全是碎片。你以为是染菌？大概率是葡萄糖饥饿触发自溶。本文按“快查—系统—进阶”三层走，覆盖补料、pH、DO、诱导...