📖 实验教程

做同步化的人大概都遇到过这个场面：加了胸苷、等了16小时、洗了三遍、放回培养箱，跑完流式一看——G1峰只占62%，剩下的细胞散在S和G2，跟没处理差不多。更气人的是隔壁组用同一管药、同一个细胞系，做出...

筛完库拿到几十条候选gRNA，一验脱靶就出事：预测高分位点实际切不动，报告基因喊阳性、全基因组测序却找不到影子。钱花了，细胞耗了，数据还不敢写进文章。问题多半不在CRISPR本身，而在验证链条的某个环...

纯化时最怕UV峰矮一截。上样量没变，峰面积却掉到原来一半，别急着换柱子。峰面积小常常不是仪器坏了，而是样品在上样缓冲液里没“活好”：pH偏了、盐高了、还原剂不够、去垢剂低于CMC，蛋白聚了或没挂柱。本...

做克隆最难受的不是没长菌，是长得少、长得慢、长出来还全是空载。你熬到凌晨两点做完去磷酸化、算好摩尔比、16°C孵了一夜，第二天涂板只冒出三个针尖大的点。问题九成不在"运气"，而在载体末端状态和连接体系...

柱子刚装好，柱效一测只有3000 pl/m，前天同一批填料还能到8000。样品没换、方法没改，峰却胖了一圈，还带拖尾。别急着怀疑填料批次，大概率是装柱均匀性出了问题。这篇从新手常犯的低级错误讲起，按装...

包涵体溶解后一透析就发白，离心一看全是沉淀；加了0.5 M精氨酸，SEC主峰前还是拖着大峰。痛点不在“加没加”，在浓度、pH、添加时相和补料方式。本文按流程拆开讲，从低级错误到进阶疑难，给你能直接照做...

同一块板读三遍，OD450 从 0.82 掉到 0.71；换了校准板重校，第二天又飘回去。这活儿最气人的地方在于——数据看着像真的，复孔也平行，但趋势是假的。这篇按「低级错误→分模块系统排→疑难杂症」...

溶氧掉到5%以下，菌体长得慢，产物也不出来——这大概是发酵车间最让人头疼的场景之一。很多人的第一反应是把搅拌转速往上拉，结果转速拉到800 rpm，溶氧没上去多少，菌体却被剪切力打伤了，泡沫还溢了罐。...

你挑的菌落长得挺圆，PCR却空泳道？阳性对照有带，样品没有。别急着换酶、换引物。菌落PCR假阴性里，模板制备问题占一大半。本文按“挑菌—转移—裂解—加样—体系”全流程拆开讲，单菌落挑取、煮沸裂解、上清...

做共表达分子伴侣的都知道那份憋屈：双抗性加了、L-阿拉伯糖也加了、16°C过夜诱导一步不落，结果超声完上清空空的，目标蛋白全趴在沉淀里。更气人的是，隔壁组用同一套pGro7+ pET，人家上清能占到三...

做13C-MFA的人大概都遇到过一个瞬间：同一批样本，昨天M+2还有40%，今天掉到18%。重复三次，三个分布。细胞没死，糖也加了，质谱也没坏——但数据就是不稳。这篇把从标记培养、淬灭提取、上机检测到...

发酵罐一挂上，DO从60%掉到5%只要十几分钟。你盯着曲线，副产物上来了，菌体却不再长。是探头坏了，还是供氧不够？更怕的是菌已经切到厌氧或溢流代谢，后面补料全乱。这篇按“先排低级错，再查供氧、耗氧和补...