📖 实验教程

微载体培养放大到5 L、10 L，最头疼的不是长不起来，而是收细胞那一刻——镜下微载体上还挂着一半细胞，活率掉到70%，搅拌子一转微载体碎成渣。消化液浓度、搅拌转速、温度时间，哪个参数偏一点结果就翻车...

做离子交换纯化最让人抓狂的一幕：UV吸收峰一鼓作气冲上去，管子里接出来的却是两个蛋白的混合物。SDS-PAGE一跑，目标条带旁边总多出一条甩不掉的杂带。杂蛋白和目标蛋白的洗脱电导几乎重合，靠梯度根本分...

做了siRNA，48 h qPCR只降20%，Western条带几乎不动。你还在正义链5'端加了2'-OMe或氨基修饰，结果沉默更差？别急着换靶点。这篇按细胞状态、转染、双链质量、序列、正义链修饰、检...

做CRISPR最扎心的不是编辑失败，是T7E1酶切胶上那条切割带若有若无，测序结果野生型峰和你面面相觑。你换了新批号试剂、重做了三次转染，效率还是趴在地上。别急着怪细胞状态，大概率是sgRNA的问题—...

分选完一上机，活率掉到60%，回收率还不到三成？这组数据谁都头大。别急着怀疑抗体和仪器。流式分选不是设个门就完事，喷嘴、压力、鞘液、上样浓度、门控和收集液都会同时拉扯活力和回收率。本文按实验流程拆成8...

KLa测出来忽高忽低，DO曲线不是爬不动，就是一头撞到100%，重复三次能差一倍。别急着怀疑罐子。动态gassing-out的坑，多半在电极、除氧终点、切换死时间和拟合区间。这篇把从校准到出数的排查路...

发酵罐上装了在线浊度探头，本来想实时盯住生物量，结果读数忽高忽低：补料一开就飙，消泡剂一滴就掉，到后期菌体明明还在长，曲线却平了甚至往下走。你怀疑探头坏了，其实大概率是干扰没补偿对。这篇按“先查低级错...

柱子刚装完，柱效一测就拉胯。保留时间漂、峰形拖尾、理论塔板数掉到2000以下——你盯着那张层析图，怀疑人生。别急着怪填料，八成是装柱压缩比没调对。这篇教程从新手常犯的低级错误讲到压缩比精调，覆盖柱效判...

峰拖尾，定量就飘。峰面积重复性差、保留时间后移、低浓度点标曲弯曲，很多时候不是仪器坏了，而是流动相pH和样品体系没匹配。这篇按“先查低级错误，再按流程拆模块，最后处理疑难”的顺序讲透。覆盖pH选择、缓...

细胞划痕实验看着简单，做起来处处是坑。明明0h划得挺齐，24h过去伤口还张着嘴；好不容易愈合了，ImageJ一量闭合率，两个复孔差出20%。问题多半不在“细胞不行”，而是接种密度、血清浓度、划痕手法、...

产酸期pH一路掉到5.0以下，菌群明显被抑制；或者产甲烷阶段pH怎么调都稳不住，挥发酸越积越多。这类问题在实验室里太常见了。本文围绕“产酸抑制+两阶段pH调控”这条主线，从低级错误、分流程系统排查到进...

做乙酸代谢工程，最怕的不是没改造，是改造完乙酸还高。摇瓶24 h乙酸冲到2.5 g/L，菌体停在OD600 2.0，发酵罐补料一快就反弹。你怀疑敲除没成功？还是溶氧、pH、碳流节点出了问题？这篇按菌株...