蛋白亲和纯化洗脱峰拖尾pH优化

来源：蛋白亲和纯化洗脱峰拖尾pH优化（DNA Lab Space 实验教程）| 编译：DNA Lab Space

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洗脱峰拖尾最磨人。峰不高，尾巴却长，SDS-PAGE还多出几条杂带。你换柱子、换批次，问题照旧。别急着怀疑填料。pH和缓冲液经常先背锅。这篇把上样、洗脱、收集、检测串起来，给你可直接改的体积、时间、浓度和验证动作，覆盖His-tag、GST和低pH洗脱场景。

第一步：快速排查低级错误

• pH计偷懒：校准液过期、电极污染，读数能偏0.2-0.5个pH单位；用4.01和7.00标准液两点校准，测缓冲液前纯水冲电极。
• 配完缓冲液不调pH：先加盐后调pH，或者调完又补酸补碱；定容前