细胞周期阻滞检测PI染色固定时间

来源：细胞周期阻滞检测PI染色固定时间（DNA Lab Space 实验教程）| 编译：DNA Lab Space

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PI染色做细胞周期，最怕什么？同一批样，有人跑出漂亮G1/S/G2峰，你的一团糊。固定时间只是表面，乙醇浓度、加液速度、RNase、上机前过滤都影响结果。别急着重做，先按下面顺序看，大概率能找到问题。这篇把固定、洗涤、染色、采集串起来，从低级错误到进阶疑难，给你一条能直接照做的排查路径。

第一步：快速排查低级错误

1. 细胞密度超过1×10^6/mL还直接固定——先稀释到1×10^6/mL，否则细胞抱团，CV直接变大。

2. PBS没吸干净就加70%乙醇——残留盐会把乙醇实际浓度拉到60%左右，固定不足；弃上清留约50 µL，轻弹散开再逐滴加。

3. 忘了加RNase A——PI会染RNA，G1峰拖尾；染色液里加100 µg/mL RNase A，37°C孵育30分钟。

4. 固定后直接扔-20°C不吹散——细胞成团，上机前用40 µm筛网过滤，别等堵针才处理。

第二步：分维度系统排查

1. 固定时间不足或温度不对

现象：G1