来源：核酸电泳条带弥散电压梯度调整（DNA Lab Space 实验教程）| 编译：DNA Lab Space
条带糊成一片，跑成笑脸，或者拖出一条长尾巴。核酸胶跑成这样，十有八九不是手法问题。别急着换试剂盒。弥散的根源通常藏在电压梯度和产热里。这篇教程按“样品—制胶—上样—电泳—设备”五段拆开，把电压、缓冲液、胶浓度这几个变量逐一排查，给你一套能照着做的排查动作链。0.8% 到 2% 的胶、5 V/cm 的场强、TAE 与 TBE 的差别，全给具体数。
第一步：快速排查低级错误
这四条，五分钟能确认完。九成“疑难杂症”其实问题出在这里。
1. 缓冲液用了第 N 次。 同一槽 TAE 反复用超过 3 次，离子耗光，导电性下降，条带自然散。直接换新配的 1×TAE（40 mM Tris-acetate，1 mM EDTA，pH 8.0）。
2. 胶没凉透就倒，或凝固不到 30 分钟。 胶体不均匀，孔径一大一小。室温静置 40 分钟再拔梳子，着急就 4°C 放 20 分钟。
3. 上样量超标。 孔里塞 1 μg 以上 DNA，条带必然变粗变宽。常规检测每孔 100–300 ng 足够。
4. 电压随手调成 150 V。 10 cm 的电泳槽，150 V 就是 15 V/cm，产热翻倍。先降到 100 V（约 10 V/cm）再谈别的。
第二步：分维度系统排查
按实验流程走一遍。每个模块都给你“怎么判断→怎么验证→怎么解决”的完整动作链。
1. 样品端：盐和蛋白在拖后腿
现象：条带整体模糊，孔位附近有亮团，或者条带向后拖尾。
原理：样品残留的盐超过 50 mM，高浓度蛋白没除干净，局部电导率就被改变，DNA 迁移速度不一致；蛋白还会把 DNA 裹住一起跑。
解决：用柱纯化或乙醇沉淀给样品脱盐。基因组 DNA 样品加 0.1% SDS 和 1 μg/μL 蛋白酶 K，55°C 消化 30 分钟，再酚氯仿抽提一次。
验证：取 2 μL 测 A260/A280。比值落在 1.8 左右再上样，偏低就是蛋白没除净。
2. 制胶端：琼脂糖没化开、浓度不匹配
现象：条带边缘毛糙，小片段跑不开，条带前窄后宽。
原理：琼脂糖颗粒没完全熔化，胶内部藏着微气泡和未熔颗粒，孔径不均一。浓度选错同样致命，用 0.8% 的胶跑 100 bp 产物，等于让它在筛子里自由落体。
解决：微波炉中火 30 秒一次，反复 3–4 次，每次取出摇匀，直到溶液完全澄清、看不到颗粒。倒胶前冷却到 60°C 再加核酸染料。片段小于 500 bp 用 1.5%–2%，0.5–5 kb 用 1%，大于 5 kb 用 0.6%–0.8%。
验证：倒好的胶对着灯看。均匀透明、无亮点、无气泡才算合格。
3. 上样端：缓冲液和甘油不对
现象：样品在孔里就扩散开，上样后半天看不到蓝色沉降。
原理：上样缓冲液里甘油低于 5%，样品密度不够，会浮出孔外。不含染料的话，你连前沿都看不见。
解决：用 6× 上样缓冲液，终浓度含 30% 甘油、0.25% 溴酚蓝。样品与缓冲液按 5:1 混匀，短暂离心 10 秒再上样。
验证：上样后立刻看一眼。蓝色样品应该稳稳沉在孔底，不飘不散。
4. 电泳条件端：电压梯度才是主角
现象：条带整体弥散，边缘呈“笑脸”，或者所有条带一起变宽。
原理：电场强度按 V/cm 算，等于电压除以两电极间距。超过 10 V/cm，焦耳热显著上升，胶中心和边缘温差能到 5–10°C，迁移率跟着不均。低于 3 V/cm，扩散时间拉长，条带同样变宽。两头都会让条带弥散。
解决：电极间距 20 cm 的槽用 100 V，也就是 5 V/cm，跑 30–60 分钟。间距 10 cm 的小槽用 50–80 V。室温高于 28°C，或者场强超过 10 V/cm，把槽放进冰浴或 4°C 冷房。大片段大于 10 kb，降到 2–3 V/cm，跑 2–3 小时。
验证：跑完看溴酚蓝前沿。平直就是对的。前沿弯曲、中间凹陷，说明产热不均，电压还得降。
5. 设备端：电极和电源的隐形偏差
现象：同一批样品，左边孔正常右边孔弥散。或者干脆跑不动。
原理：铂丝电极氧化发黑，局部电场畸变。电源输出纹波大，实际电压和显示值能差 20%。
解决：用万用表量槽内两点电压。电极发黑，用 1 M HCl 浸泡 10 分钟再清水冲净。
验证：同一块