来源：qPCR扩增曲线异常引物二聚体（DNA Lab Space 实验教程）| 编译：DNA Lab Space
qPCR跑完，扩增曲线拖尾、NTC起峰、熔解曲线多出一个小峰——大概率是引物二聚体在捣乱。别急着换试剂。先看NTC，再看引物浓度和退火温度。本文按“快速排低级错→分模块查体系/引物/程序/数据→进阶疑难”走一遍，覆盖20 µL体系常用参数、熔解曲线判断、胶电泳验证和重设计策略。你照着做，多数二聚体峰能定位。
第一步：快速排查低级错误
1. 引物终浓度加高了。 10 µM母液各0.8 µL加进20 µL体系，终浓度0.4 µM，NTC容易起晚峰；降到各0.4 µL，终浓度0.2 µM再跑。
2. NTC被污染。 枪头、水、模板气溶胶都会让NTC出Ct；换新滤芯枪头，水现分装，NTC收尾加。
3. 体系没混匀或有气泡。