来源：大肠杆菌表达膜蛋白包涵体去垢剂筛选（DNA Lab Space 实验教程）| 编译：DNA Lab Space
做膜蛋白的都有这个体会：大肠杆菌里表达量挺好，全在包涵体里。好不容易用8M尿素溶解了，一去垢剂就沉淀。超速离心完跑SDS-PAGE，目标条带全在沉淀里，上清干干净净。别急着换载体换菌株，大概率是去垢剂筛选环节出了问题。这篇文章把包涵体溶解、复性稀释、去垢剂种类和浓度、缓冲液条件到检测方法，一条一条拆开讲。每一步给你具体参数和判断标准。
第一步：快速排查低级错误
1. 去垢剂浓度低于CMC。直接看你用的去垢剂浓度是不是在CMC以上2-5倍，DDM的CMC约0.0087%，你用0.1%根本不够，至少1%。
2. 尿素没除干净。残留尿素超过0.5M就会让膜蛋白聚集，透析或稀释后测一下电导率，或者用尿素检测试剂盒确认。
3. 超速离心条件不够。100,000×g至少30分钟，4°C。很多人用12,000×g转15分钟，沉淀不下来的小聚集体全当上清了。
4. pH离等电点太近。膜蛋白在等电点附近溶解度最低，查一下你的蛋白pI，缓冲液pH至少偏离1.5个单位。
第二步：分维度系统排查
模块一：包涵体溶解不彻底
现象：8M尿素溶解后，离心管底还有白色絮状物，SDS-PAGE上清里目标条带很弱。
原理：包涵体里膜蛋白和脂质、外膜蛋白混在一起，尿素渗透需要时间。膜蛋白疏水性强，8M尿素有时都搞不定。
解决步骤：
1.