来源：微生物发酵菌体自溶葡萄糖饥饿调控（DNA Lab Space 实验教程）| 编译：DNA Lab Space
发酵罐里 OD600 从 80 掉到 40，上清 DNA 飙到 500 ng/µL，镜检全是碎片。你以为是染菌？大概率是葡萄糖饥饿触发自溶。本文按“快查—系统—进阶”三层走，覆盖补料、pH、DO、诱导、cAMP-CRP、自溶素和噬菌体，给你能直接上手的判断、验证、解决参数。
第一步：快速排查低级错误
1. 补料糖实际没进去。现象：残糖 0 g/L，OD 先稳后崩。解决：用葡萄糖试纸或生物传感仪每 30 min 测残糖，补料母液 500 g/L，维持残糖 0.5–2 g/L。
2. pH 电极漂了。现象：显示 7.0，离线测 7.8。解决：两点校准 pH 4.0/7.0，大肠杆菌控 6.8–7.2，枯草芽孢杆菌控 7.0–7.2。
3. 溶氧掉零后硬撑。现象：DO 从 30% 掉到 0%，10 min 后反弹到 80%。解决：DO 联动转速 600–1000 rpm、通气 1–2 vvm，维持 DO 20–30%。
4. IPTG 加太早、太猛。现象：诱导后 2 h 菌体变空、碎片增多。解决：OD600 0.6–0.8 加 0.1–0.5 mM IPTG，降温到 18–25°C，诱导后补 0.5% 葡萄糖。
第二步：分维度系统排查
1. 残糖归零，葡萄糖饥饿直接拉高 cAMP。现象：OD600 1 h 内掉 20%，上清蛋白升 3–10 倍，DNA 大于 100 ng/µL。原理：残糖低于 0.1 g/L 时，胞内 cAMP 升高，CRP 激活，自溶素和蛋白酶基因上调，肽聚糖被水解。解决：把恒速补料改成指数-脉冲补料。500 g/L 葡萄糖母液起始 3–5 mL/h，每 30 min 按 OD 调整；