来源：细胞外囊泡分离纯度提升（DNA Lab Space 实验教程）| 编译：DNA Lab Space
你跑完NTA颗粒数爆表，WB却全是白蛋白？超离管底一坨黄褐色，重悬后NTA主峰跑到300 nm？EV纯度上不去，下游测序、电镜、功能实验全白做。别急着换试剂盒。这篇教程按“先查低级错误→再走流程排查→最后啃硬骨头”的顺序，把超速离心、SEC、密度梯度、亲和捕获的污染来源拆开讲。每步给判断依据、验证方法和具体参数。照单操作，颗粒/蛋白比大概率能拉高一个档。
第一步：快速排查低级错误
新手最容易在基础操作上翻车。先查这4个地方。
1. 收集上清前没换无外泌体血清。血清自带EV和脂蛋白。解决：用无外泌体血清或直接无血清培养24-48 h，收集前换液，上清立即处理。
2. 差速离心偷懒。细胞碎片、凋亡小体混进来。解决：300 × g 10 min，2000 × g 20 min，10000 × g 30 min，4°C，每次取上清。
3.