毛细管电泳峰形差进样电压

来源:毛细管电泳峰形差进样电压(DNA Lab Space 实验教程)| 编译:DNA Lab Space

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跑了一晚上CE,图谱上峰又胖又拖尾,峰高忽上忽下,手一抖把进样电压调高,结果更糟。别急着换柱子,也别怀疑仪器坏了。八成问题出在进样环节。这篇教程按“低级错误→分维度排查→进阶疑难”三层往下走,每一步都给出判断、验证、解决的具体动作和实打实的参数。看完你至少能自己定位90%的峰形异常。

第一步:先花十分钟,排除这几个低级错误

1. 毛细管进样端切口毛糙或有缺口。 拆下柱子,用陶瓷切刀垂直切掉2 mm,放大镜下切口应是平整圆环。有缺口的柱子,进样量根本不受控。

2. 缓冲液或样品瓶里有气泡。 BGE超声脱气5 min,样品12000 × g离心5 min。气泡进柱就是一根尖刺峰,或者断崖式基线。

3. 样品没过膜。 0.22 μm滤膜过滤,蛋白样品再加一步10000 × g、10 min离心。颗粒堵柱,后段峰全部拖尾。

4. 进样端插得太浅或戳到底。 液面至少5 mm高,毛细管插入液面下约3 mm。插到底会吸进瓶底颗粒。

教程配图2:毛细管电泳峰形差进样电压 排查流程示意
▲ 教程配图2:毛细管电泳峰形差进样电压 排查流程示意

第二步:分模块系统排查

1. 样品基质电导与BGE失配

现象:峰宽突然翻倍,峰顶分叉,峰高忽大忽小。

原理:样品区和BGE的电导差太大,进样界面的电场就会跳变。样品电导远低于BGE(比如用水稀释),会出现场放大堆积,峰看着变尖,一过量就畸变;样品盐浓度远高于BGE,区带在进样瞬间就被拉宽。

解决:样品盐浓度压到BGE的1/10到1/2。常用做法是用10 mM磷酸盐缓冲液(pH 7.4)透析或稀释,最终电导控制在1-3 mS/cm,盐浓度别超20 mM。

验证:往样品里加NaCl做梯度,0、10、50、100 mM各跑一针。主峰对称因子As落在0.8-1.2算合格,超过1.5就是基质问题。

2. 进样量过载

现象:峰高不随浓度线性上升,峰顶被削平,或者一个峰裂成两个。

原理:进样

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