化学法制备感受态效率低CaCl2

📅 2026-10-02 📰 DNA Lab Space 实验教程 2026-10-02 📂 教程 👁 25

来源：化学法制备感受态效率低CaCl2（DNA Lab Space 实验教程）| 编译：DNA Lab Space

同一株DH5α，别人转化pUC19长几百个克隆，你只长几个？CaCl2法看着简单，坑全在细节。菌液OD、离心温度、CaCl2预冷、热激秒表、复苏时间，任何一步跑偏，效率可能从10^8掉到10^5。下面按“低级错误—流程系统排查—进阶疑难”走一遍，给你具体参数、判断办法和验证动作。

1. 菌液摇过头。OD600超过0.6，细胞膜状态差，转化效率断崖式下跌。重新接1:100过夜菌到LB，37°C、200 rpm摇到OD600 0.35-0.5，立刻冰浴。

2. CaCl2没预冷或配错。用了室温0.1 M CaCl2，或浓度配成0.5 M，感受态直接报废。配0.1 M CaCl2，0.22 µm过滤，4°C预冷，冰上操作。

3. 离心和重悬太

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