来源：凝胶染色脱色过度（DNA Lab Space 实验教程）| 编译：DNA Lab Space
跑完胶，染色时条带还清楚，脱色半小时后只剩Marker？或者背景干净得像没跑过。别急着扔胶，也别怪抗体。脱色过度多半不是单一原因，固定、染色、脱色液、胶厚、上样量、成像都可能坑你。下面按操作流程拆开，从新手低级错到进阶疑难，给你能直接照做的排查路径。
第一步：快速排查低级错误
1. 脱色液倒太多，胶泡在里面过夜。解决：脱色液刚没过胶，室温摇10-20分钟换一次，总30-60分钟停。
2. 染色液反复用，颜色都发灰。解决：新配0.1%考马斯亮蓝R-250，45%甲醇+10%乙酸，染色30-60分钟。
3. 脱色液酸醇太猛。解决：把甲醇降到10%、乙酸7.5%，或者用5%甲醇+7%乙酸，别用40%甲醇+10%乙酸脱色。
4. 染色前没固定，直接染完就脱。解决：先40%甲醇+10%乙酸固定30分钟，再染色。
第二步：分维度系统排查
1. 固定不充分。
现象：小蛋白条带先弱，大蛋白还在，胶边缘发白。
原理：甲醇/乙酸把蛋白沉淀在胶里，没固定就染色，染料只停在表面，一脱就掉。
解决：染色前固定30分钟，厚胶1.5 mm固定45分钟；固定液40%甲醇+10%乙酸，室温60 rpm。
验证：裁一条含Marker的胶，固定后直接染色不脱色，看条带是否清楚。若仍弱，查上样。
2. 染色不足。
现象