来源：诱导温度过高包涵体（DNA Lab Space 实验教程）| 编译：DNA Lab Space
37°C、0.5 mM IPTG 过夜？收菌一跑胶，目标蛋白全在沉淀里。上清干净得像没诱导。别急着换载体，温度、诱导点、裂解方式都可能背锅。本文按“先排低级错→再按流程拆→最后啃疑难”走，覆盖温度、IPTG、宿主、裂解、复性和促溶标签。你照着做，大概率能把上清里的条带救回来。
第一步：快速排查低级错误
1. 拿错管或没留对照？同时留未诱导、诱导后1 h和4 h样品，跑12% SDS-PAGE，直接看目标条带何时出现、去了上清还是沉淀。
2. IPTG母液反复冻融失效？配1 M IPTG水溶液，0.22 µm过滤，分装-20°C，避免反复化冻；常用终浓度0.1–0.5 mM，37°C可先用0.5 mM。
3. OD600冲到1.0以上才诱导？OD600 0.4–0.6加IPTG，别超过0.8；菌太老，蛋白酶多，包涵体也更容易被误判。
4. 裂解不充分就下结论？1 mg/mL溶菌酶冰上30 min，加1 mM PMSF，超声3 s on/5 s off，冰上10 min，12000 g、4°C离心20 min，再看上清和沉淀。
第二步：分维度系统排查
1. 诱导温度与时间
现象：37°C诱导4 h，目标带大量出现在沉淀，上清几乎看不到。
原理：高温下转录翻译太快，新生肽链折叠跟不上，疏水区暴露后互相抱团。
解决：降到16–18°C，IPTG降到0.1–0.3 mM，诱导16–20 h。若必须37°C，缩到1–2 h，立刻收菌。
验证：同体积上清、沉淀跑胶，比较目标带比例；上清做Western确认是否可溶。
2. IPTG浓度与诱导时机
现象：0.5–1 mM IPTG、OD600>1.0诱导，沉淀目标带特别浓。
原理：T7启动子过强，重组蛋白超过宿主折叠能力，未折叠链堆积。
解决：OD600 0.4–0.6加IPTG，终浓度从0.05、0.1、0.25、0.5 mM做梯度；BL21(DE3)可试0.05–0.1 mM。培养瓶装液量别超过1/5，200 rpm通气。
验证：每个IPTG浓度留上清和沉淀，18°C诱导过夜，跑胶找“上清有带、